[发明专利]一种岩黄连的离体保存方法

说明书

本发明公开了一种岩黄连的离体保存方法，包括岩黄连的组培两步成苗，再利用组培两步成苗得到的具有4~6片叶的试管苗，接种到保存培养基进行离体保存，本发明保存培养基为1/2MS+PPP₃₃₃1.0mg/l+AC0.3%+蔗糖4.5%+琼脂0.4%。培养基的pH值为5.8，温度为21±1°C，光照强度1400~1600lx，光照时间为8~10小时/天。利用本发明的方法可在短期内提供大量岩黄连的优质种苗，同时减少了配制培养基和转瓶的步骤，节约了大量人力物力，因此简单易行、生产成本降低，并且，有效解决了岩黄连种质资源保存及规模化育苗问题。

技术领域

本发明属于生物组织培养技术领域，具体地，涉及岩黄连的离体保存方法。

背景技术

岩黄连(Corydalis saxicola Bunting)是罂粟科植物，为多年生草本植物，分布于我国广西、广东、福建、 湖南等省。全草入药，是著名的壮瑶药品种，全草含脱氢卡维丁(岩黄连碱)等活性成分；具有显著的抗菌、消炎、镇痛和强安定作用，并观察到有抑制肿瘤细胞作用；主治疮疖肿毒、肝炎、肝硬化、肝癌等症岩黄连植物分布局限于石灰岩山区，属石山特有种。由于生境条件恶劣，其自然繁殖率很低，加上其种子细小，繁殖比较困难，种群发展障碍，资源蕴藏量十分有限。近年来人们大量采挖和收购，导致了野生资源的供不应求，野生岩黄连资源濒临枯竭，同时在引种栽培时较难成活，给种质保存与利用带来较大的困难。随着大量采挖和收购导致野生资源濒临枯竭，市场供不应求，人工栽培种植成本高且不成规模，开展节约型组织培养工厂化生产是形势所需。采用生物技术组织培养技术，可以有效快速地提高岩黄连种苗的繁殖速度和质量，实现岩黄连优质种苗的工厂化育苗，以满足生产上的需要。

组织培养的关键技术是培养基及其培养条件。

目前对于岩黄连离体保存的研究还比较少，申请人在授权公开号为CN201310537770.5的中国发明专利“一种岩黄连的组织培养快速繁殖方法”中也公开了利用组织培养技术快速繁殖岩黄连的方法，但本发明中申请人将岩黄连组培快繁过程中的壮苗和生根同时进行，减少了一个步骤，可以达到同样的扩繁效果，因此采用本发明将节省人力物力，同时公开了岩黄连离体保存培养基和培养条件，因此，本发明的研究和公开具有十分重要的意义。

发明内容

针对目前存在的问题，本发明提供一种岩黄连的离体保存方法，利用组织培养技术对其进行组培两步成苗快繁，通过采用合适的保存培养基对其进行离体保存，不仅可以有效挽救濒危的岩黄连物种，使之成为可再生资源，还可以为岩黄连种植提供优良一致的种苗技术和室内离体保存提供技术支持。

为了实现上述目的，本发明釆取了如下技术方案：

（1）不定芽诱导培养诱导培养：取岩黄连茎尖作为外植体，在75%乙醇中浸泡30~45s，无菌水冲洗2~3次，投入到添加2滴吐温的0.1%升汞4min，再用无菌水冲洗2~3次，再次投入添加2滴吐温的0.1%升汞4min，最后用无菌水冲洗2~3次后切割为0.5~1.0cm长接种在诱导培养基上，培养10~14天，茎尖分化形成嫩黄绿色丛生芽；

（2）丛生芽壮苗生根培养：经25~35天，丛生芽长至2~3cm，转入壮苗生根培养基培养1个月后，长成具根和4~6片叶、4条以上根数的试管苗；

（3）试管苗离体保存：将由丛生芽分化产生的具有4~6片叶、4条以上根数的试管苗接种到保存培养基进行离体保存。

步骤（1）中所述的诱导培养基为：MS+6-BA1.5mg/l+NAA0.5 mg/l +KT0.4mg/l+蔗糖2.5% +琼脂0.4%；所述培养基的pH值为5.8，培养温度为24~28°C，光照强度1400~2000lx，光照时间为12~14小时/天。