[发明专利]一种藻油DHA提取制备方法

权利要求书

1.一种藻油DHA提取制备方法，其特征在于，包含如下步骤：

(1)将寇氏隐甲藻进行培养和发酵；所述培养和发酵为藻种培养和异养发 酵，得到微藻原料；

(2)干燥；将步骤(1)得到的微藻原料进行干燥处理，得到微藻粉末；

(3)破壁预处理；将步骤(2)得到的微藻粉末采用超声处理法进行微藻 破壁预处理，得到微藻干粉；

(4)微藻DHA提取；将步骤(3)得到的微藻干粉采用索氏提取法和/或超 临界二氧化碳萃取法进行微藻DHA提取，得到微藻油脂；

(5)尿素包合富集纯化；将步骤(4)得到的微藻油脂通过尿素包合法富 集纯化DHA；得到微藻DHA藻油；

(6)脱色除臭；将尿素包合富集纯化所得的微藻DHA藻油加入占油体质量 3％的活性白土进行脱色，脱色温度为80℃，脱色时间为45分钟，同时抽真空并 适度搅拌，过滤除去白土，对油脂进行水蒸气气提除臭，汽提温度为85℃，真 空度为0.30Kpa，脱臭时间为1小时，然后维持真空状态下缓慢冷却，离心得藻 油DHA成品。

2.如权利要求1所述的一种藻油DHA提取制备方法，其特征在于，所述步 骤(1)包含准备培养基以及异氧发酵的过程；

所述准备培养基包含,

(S11)固体培养基：

培养基组成：葡萄糖50g，味精30g，酵母膏6g，氯化钠8g，磷酸二氢钾 2g，硫酸镁6g，无水氯化钙0.5g，碳酸氢钠0.2g，A5溶液1ml，土浸液2ml， 纯净水1000ml；琼脂2％；

(S12)一级种子培养基：

培养基组成：葡萄糖20g，味精10g，酵母膏2g，氯化钠8g，磷酸二氢钾 2g，硫酸镁6g，无水氯化钙0.5g，碳酸氢钠0.2g，A5溶液1ml，土浸液2ml， 纯净水1000ml；

(S13)二级种子培养基：

培养基组成：葡萄糖40g，味精20g，酵母膏4g，氯化钠8g，磷酸二氢钾 2g，硫酸镁6g，无水氯化钙0.5g，碳酸氢钠0.2g，A5溶液1ml，土浸液2ml， 纯净水1000ml；

(S14)发酵培养基：

培养基组成：葡萄糖50g，味精30g，酵母膏6g，氯化钠8g，磷酸二氢钾 2g，硫酸镁6g，无水氯化钙0.5g，碳酸氢钠0.2g，A5溶液1ml，土浸液2ml， 纯净水1000ml；

(S15)菌种保藏培养基：

所述固体培养基或发酵培养基中添加有青霉素，添加量为50～100mg/L，并 低温保藏。

3.如权利要求2所述的一种藻油DHA提取制备方法，其特征在于：所述菌 种保藏培养基为用于保藏寇氏隐甲藻的固体培养基。

4.如权利要求2所述的一种藻油DHA提取制备方法，其特征在于：所述异 养发酵包含如下步骤，

(S21)一级种子培养：

从固体培养基的平板上取一定量纯的寇氏隐甲藻，接种到一级种子培养基， 置于摇床上，28℃、120rpm条件下培养48小时，得到一级种子；

(S22)二级种子培养：

将一级种子按20％的接种量转接到二级种子培养基，28℃、150rpm条件下 培养48小时，得到二级液体种子；

(S23)发酵培养：

取5L标准发酵罐，自动调控温度、pH、溶氧、搅拌速度、通风量和流加 速度；发酵条件为：将二级液体种子按4％接种量接种于发酵培养基中，在25℃ 和4L/min的通气量下培养；每12h取样，测定葡萄糖浓度、生物量；每24h 测定脂肪酸和DHA含量；通过流加2mol/LHCl或2mol/LNaOH自动控制发酵液 pH。