[发明专利]淀粉样蛋白的检测方法有效
申请号: | 201610108749.7 | 申请日: | 2016-02-26 |
公开(公告)号: | CN105651752B | 公开(公告)日: | 2019-04-12 |
发明(设计)人: | 杨延莲;黄欢;李平;王琛 | 申请(专利权)人: | 国家纳米科学中心 |
主分类号: | G01N21/64 | 分类号: | G01N21/64 |
代理公司: | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人: | 王文君 |
地址: | 100080 北*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 淀粉 蛋白 检测 方法 | ||
1.一种检测淀粉样蛋白含量的方法,其特征在于,该方法是以碳基量子点作为探针的荧光光谱检测方法;包括标准曲线的绘制、样品待测液的制备和快速检测;
所述标准曲线的绘制包括以下步骤:
1)制备1 mg/mL 的碳基量子点溶液;
2)将Aβ粉末配成1mg/mL的溶液,溶剂为六氟异丙醇,37℃孵育3小时后,氮气吹干,以1%体积含量的二甲基亚砜为助溶剂,分散在超纯水中形成浓度分别为50 mg/mL,100 mg/mL,150 mg/mL,200 mg/mL,250 mg/mL,300 mg/mL的6份Aβ单体溶液;取该6份Aβ单体溶液各100微升,分别与100 微升1 mg/mL 的碳基量子点溶液在96孔板中混合;之后,置于荧光光谱仪中,测定碳基量子点的荧光强度,设定激发波长为400 nm,发射波长为500 nm;以Aβ单体含量mg/mL为横坐标,荧光强度值为纵坐标,绘制Aβ单体标准曲线;
其线性回归方程为Y=ax+b,相关系数R 为0.9557,其中x 代表Aβ单体的浓度mg/mL,Y代表荧光强度值;a=-5.2,b=1829.5;
所述样品待测液的制备包括以下步骤:
将待测样品经适当处理,去除干扰物质后,保留淀粉样蛋白,从而获得样品待测液;
所述快速检测包括以下步骤:
1)制备1 mg/mL 的碳基量子点溶液;
2)取上述样品待测液100微升与100 微升1 mg/mL 的碳基量子点溶液在96孔板中混合;之后,置于荧光光谱仪中,测定碳基量子点的荧光强度,设定激发波长为400 nm,发射波长为500 nm;同时做空白对照试验,按下式计算待检样品中Aβ单体含量:
x=(I-I0)/a
其中,x为待测样品中Aβ单体含量,I为待测样品的荧光强度数值,I0为空白量子点荧光强度数值,a为标准曲线的斜率数值-5.2;
3)将正常样品中Aβ单体含量与所得待检样品中Aβ单体含量进行比较,获得待检样品中异常淀粉样蛋白的含量。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤3)包括通过上述方法获得正常样品中Aβ单体含量x0,与待检样品中Aβ单体含量x比较,得到待检样品中异常淀粉样蛋白的含量为x0-x。
3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,所述样品待测液包括脑脊液、血液。
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