[发明专利]淀粉样蛋白的检测方法

说明书

本发明涉及一种淀粉样蛋白的检测方法。具体而言，本发明是以碳基量子点为荧光探针，利用碳基量子点独特的结构和发光特性而实现的。本发明不仅为淀粉样蛋白聚集检测提出了新的方案，并且避免了传统荧光检测方法中对待测体系造成的干扰。

技术领域

本发明涉及淀粉样蛋白的检测方法，尤其涉及利用碳基量子点检测淀粉样蛋白的方法，涉及蛋白结构检测领域。

背景技术

淀粉样变性的发生源自蛋白质的错误折叠，以沉淀的形式沉积在身体组织或器官，并直接导致阿尔兹海默症、帕金森综合症、疯牛病等病症(Cell,2012,148,1188.)。淀粉样蛋白具体聚集过程如下，溶液中蛋白质发生错误折叠，向β-片层结构发生转变，继而组装成具有生理毒性的极小寡聚体与弥散型小寡聚体、环形原纤维、原纤维、纤维，最终形成斑块。如检测跟踪淀粉样蛋白结构的改变，是当今研究热点，目前，硫黄素T和刚果红是最常用检测该过程的荧光探针(Nature.2011,472,226.)。然而，这些方法在检测过程中会对体系产生干扰。为了探究更多的检测方法，多种纳米材料如：金纳米颗粒、聚集诱导发光分子和光子晶体(Chem.Commun.,2015,51,1866.)等受到了广泛研究。然后这些材料的制备过程繁琐且生物相容性一般，为临床应用带来了很大的不便。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用碳基量子点检测淀粉样蛋白的方法，该检测方法可有效检测淀粉样蛋白含量，还可有效检测淀粉样蛋白聚集动力学行为。本发明方法简便、成本低，成本低且碳基量子点材料生物相容性好；检测过程对体系不产生干扰；解决了现今检测方法单一、检测过程引入干扰的技术瓶颈。

为实现上述目的，本发明的技术方案如下：

本发明首先提供碳基量子点在淀粉样蛋白检测上的应用。

所述应用至少包括用于检测淀粉样蛋白的凝聚构象，用于检测淀粉样蛋白聚集动力学，或用于检测淀粉样蛋白含量等。

本发明还提供一种检测淀粉样蛋白的凝聚构象的方法，所述方法包括：

1)将待确定凝聚构象的淀粉样蛋白与碳基量子点相结合，获得其光谱特征；

2)将已知凝聚构象的淀粉样蛋白与碳基量子点相结合，获得预定光谱特征；

通过比较步骤1)和步骤2)所得的光谱特征，确定所述待确定凝聚构象的淀粉样蛋白的凝聚构象；其中所述光谱特征是用荧光光谱法评估的。

优选地，所述已知凝聚构象包括纤维状构象。

本发明还提供一种检测淀粉样蛋白聚集动力学的方法，所述方法包括将碳基量子点与孵育不同时间的淀粉样蛋白溶液进行混合，根据碳基量子点荧光强度的变化，检测淀粉样蛋白的聚集动力学行为。

具体地，上述检测淀粉样蛋白聚集动力学的方法，包括以下步骤：

1)将淀粉样蛋白粉末配成完全溶解的有机溶液，恒温孵育一段时间后，氮气吹干，分散在超纯水中形成一定浓度的淀粉样蛋白水溶液；之后，将样品置于摇床中，恒温、恒速老化；

2)每隔一定时间从上述溶液中取出定量样品，滴入细胞培养板(如96孔板)，并加入碳基量子点溶液，混合均匀；优选每次至少取三组平行样品进行实验；每次取点后，淀粉样蛋白原液都放回摇床；

3)将细胞培养板(如96孔板)中的混合液置于荧光光谱仪中，设定激发和发射波长，测定相应时间碳基量子点的荧光强度；

4)以时间为横坐标，荧光强度为纵坐标，绘制碳基量子点的荧光强度随时间变化趋势图，对数据进行拟合，得到碳量子点检测的淀粉样蛋白聚集行为动力学曲线。

上述检测淀粉样蛋白聚集动力学的方法，其中

步骤1)所述有机溶液为六氟异丙醇(HFIP)。