[发明专利]一种评价转GmDREB1抗逆小麦非预期效应的方法

权利要求书

1.一种评价抗逆性转GmDREB1植物具有非预期效应的方法，包括如下步骤：

1)、对正常条件下培养转GmDREB1植物、逆境条件下培养转GmDREB1植物、正常条件下培养受体植物和逆境条件下培养受体植物进行RNA-seq测序分析，得到正常条件下培养转GmDREB1植物表达基因谱、逆境条件下培养转GmDREB1植物表达基因谱、正常条件下培养受体植物表达基因谱和逆境条件下培养受体植物表达基因谱；

2)、比较所述正常条件下培养转GmDREB1植物表达基因谱和所述逆境条件下培养转GmDREB1植物表达基因谱，有差异的表达基因，记作转GmDREB1植物环境效应引起的差异表达基因组；

比较所述正常条件下培养受体植物表达基因谱和所述逆境条件下培养受体植物表达基因谱，有差异的表达基因，记作受体植物环境效应引起的差异表达基因组；

比较所述正常条件下培养转GmDREB1植物表达基因谱和在所述正常条件下培养受体植物表达基因谱，有差异的表达基因，记作正常环境转GmDREB1植物转基因效应差异表达基因组；

比较所述逆境条件下培养转GmDREB1植物表达基因谱和所述逆境条件下培养受体植物表达基因谱，有差异的表达基因，记作逆境环境转GmDREB1植物转基因效应差异表达基因组；

由所述转GmDREB1植物环境效应引起的差异表达基因组和所述受体植物环境效应引起的差异表达基因组组成环境效应引起的差异表达基因谱；

由所述正常环境转GmDREB1植物转基因效应差异表达基因组和所述逆境环境转GmDREB1植物转基因效应差异表达基因组组成转基因效应相关差异表达基因谱；

比对所述转基因效应相关差异表达基因谱和所述环境效应引起的差异表达基因谱，选取二者的差异表达基因且隶属于所述转基因效应相关差异表达基因谱的基因，记作转基因效应引起的特异差异表达基因；

比对所述转GmDREB1植物环境效应引起的差异表达基因组和所述受体植物环境效应引起的差异表达基因组：将种类相同的差异表达基因记作逆境胁迫下所述转GmDREB1植物和所述受体植物共同差异表达基因组；将种类不相同且隶属于所述受体植物环境效应引起的差异表达基因组的差异表达基因，记作逆境胁迫下所述受体植物单独变化的环境效应引起差异表达基因组；将种类不相同且隶属于所述转GmDREB1植物环境效应引起的差异表达基因的差异表达基因，记作逆境胁迫下所述转GmDREB1植物单独变化的环境效应引起差异表达基因组；

3)分析所述转基因效应引起的特异差异表达基因、所述逆境胁迫下转GmDREB1植物和受体植物共同差异表达基因组、所逆境胁迫下受体植物单独变化的环境效应引起差异表达基因组、所述逆境胁迫下转GmDREB1植物单独变化的环境效应引起差异表达基因组，

若满足如下A或A+B+C，则所述转GmDREB1植物存在非预期效应；

若不满足A或A+B+C，则所述转GmDREB1植物不存在非预期效应；

所述A为转基因效应引起的特异差异表达基因在转GmDREB1植物和受体植物之间存在差异表达且该转基因效应引起的特异差异表达基因与致敏因子或毒性因子的产生相关：

所述B为从逆境胁迫下转GmDREB1植物和受体植物共同差异表达基因组中选取在逆境胁迫下在转GmDREB1植物和受体植物为同一表达模式且表达倍数不同的差异基因的功能与抗逆无关，且能引起致敏或毒性因子的产生；

所述C为所述逆境胁迫下转GmDREB1植物单独变化的差异表达基因组和所述逆境胁迫下所述受体植物单独变化的差异表达基因组所有基因中至少一个基因的功能与抗逆无关，且能引起致敏或毒性因子的产生。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

步骤2)中，所述比较用火山图展示或DESeq；

所述比对采用Ven图分析；

步骤3)中，检测所述差异基因是否与抗逆无关采用GO功能分析；

检测所述差异基因是否能引起致敏或毒性因子的产生采用GO功能分析或比对致敏因子或毒性因子数据库；

所述A中转基因效应引起的特异差异表达基因在转GmDREB1植物和受体植物之间存在差异表达是通过荧光定量PCR和半定量PCR确定。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：

所述抗逆性为抗盐性；

所述逆境胁迫为盐胁迫。