[发明专利]用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及细胞工程技术领域，特别涉及一种用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂及其制备方法和应用。

背景技术

血管性痴呆(VaD)是老年期痴呆的主要类型之一，是由一系列脑血管因素导致脑组织损害引起的以认知功能障碍为特征的综合征。临床主要表现为认知功能减退，严重者精神行为异常，影响患者的生活质量。随着社会老龄化的到来和脑血管病发病率的增高，血管性痴呆的发病率逐渐上升，而目前血管性痴呆的治疗尚无针对性特效药物。

干细胞是一类具有分化潜能的原始细胞，在适当条件下可以向特定的成熟组织细胞分化。具有神经细胞分化潜能的细胞主要有三种类型：胚胎干细胞、神经干细胞和成体细胞。胚胎干细胞存在一定的社会伦理道德问题，神经干细胞的获得需体外分离动物胚胎或成熟中枢神经系统的细胞，并利用含有特殊生长因子的条件培养基维持神经干细胞的未分化状态，操作繁琐，且神经干细胞复杂的定位决定它很难大量获得并应用于临床，而成体干细胞一旦加以适合神经分化的刺激，在体内、体外均可分化为神经细胞。成体干细胞包括神经干细胞、造血干细胞、骨髓间充质干细胞、表皮干细胞等。在成体干细胞中，骨髓间充质干细胞由于其取材方便、来源丰富而成为用于移植治疗中枢神经系统疾病的研究热点之一。

骨髓间充质干细胞(BMSCs)是存在于骨髓中的一类非造血干细胞，其具有强大的增殖和多向分化的潜能，免疫原性低，并能在体内外分化为神经元样细胞、肌细胞和成骨细胞等，对于治疗神经系统疾病的研究有着重要的意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，针对现有技术中用于治疗血管性痴呆的药物疗效差等缺陷，提供一种能够提高血管性痴呆疗效的用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂及其制备方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂，包括骨髓间充质干细胞、Brdu、表皮生长因子、成纤维细胞生长因子和人血白蛋白磷酸缓冲液。

在本发明提供的用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂中，所述干细胞制剂中，所述干细胞制剂中，所述骨髓间充质干细胞的浓度为(1～3)×10⁶个/ml。

在本发明提供的用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂中，所述干细胞制剂中，

Brdu的浓度为5～15μmol/L、

表皮生长因子的浓度为2～10μg/ml、

成纤维细胞生长因子的浓度为2～20μg/ml，

以及人血白蛋白缓冲液的质量分数为0.5～2.0％。

在本发明提供的用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂中，所述干细胞制剂中，

骨髓间充质干细胞的浓度为2×10⁶个/ml、

Brdu的浓度为10μmol/L、

表皮生长因子的浓度为6μg/ml、

成纤维细胞生长因子的浓度为11μg/ml，

以及人血白蛋白缓冲液的质量分数为1％。

在本发明提供的用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂中，所述人血白蛋白缓冲液是由人血清白蛋白原液和PBS缓冲液混合制成的。

在本发明提供的用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂中，所述人血白蛋白缓冲液中，人血清白蛋白原液和PBS缓冲液的体积比为(0.5～2)：1。

本发明进一步保护上述用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂的制备方法，

获取骨髓间充质干细胞的过程包括以下步骤：

采集骨髓，肝素抗凝，在percoll分离液中离心，取中层单核细胞，PBS缓冲液离心洗涤，弃上清液，即收获原代骨髓间充质干细胞；

将原代骨髓间充质干细胞浓度调整至1×10⁶～1×10⁸个/25ml，加入血清培养基进行培养；当细胞生长至融合时，PBS漂洗，加入胰蛋白酶，见胞质回缩，细胞间隙增大后，加入含胎牛血清的DMEM培养基终止消化，按1：2～1：3比例接种进行传代培养至细胞生长到融合，继续传代至获得第3～5代中任一代骨髓间充质干细胞，胰酶消化后，离心清洗。

在本发明提供的用于治疗血管性痴呆的干细胞制剂的制备方法中，所述血清培养基中添加有10^-6～10^-8mol/L的氢化可的松、80-120U/ml的青霉素及80-120mg/ml的链霉素。

本发明进一步保护上述干细胞制剂在制备治疗血管性痴呆的药物中的应用。