[发明专利]用于治疗肝衰竭的干细胞制剂及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种用于治疗肝衰竭的干细胞制剂，其特征在于，包括间充质干细胞和血管内皮细胞。

2.根据权利要求1所述的用于治疗肝衰竭的干细胞制剂，其特征在于，所述干细胞制剂中，所述间充质干细胞的浓度为(4～6)×10⁶个/ml，所述血管内皮细胞的浓度为(1～2)×10⁶个/ml。

3.根据权利要求2所述的用于治疗肝衰竭的干细胞制剂，其特征在于，还包括干细胞因子、黄芪、岩藻多糖和Y-27632。

4.根据权利要求3所述的用于治疗肝衰竭的干细胞制剂，其特征在于，所述干细胞制剂中，

干细胞因子的浓度为10～200μg/ml、

黄芪的浓度为100mg/L～200mg/L、

岩藻多糖的浓度为1～100μg/mL、

和Y-27632的浓度为10～50μM。

5.根据权利要求4所述的用于治疗肝衰竭的干细胞制剂，其特征在于，所述干细胞制剂中，还包括质量分数为2.5～5.0％的枸橼酸钠。

6.根据权利要求5所述的用于治疗肝衰竭的干细胞制剂，其特征在于，所述干细胞制剂中，

间充质干细胞的浓度为5×10⁶个/ml、

血管内皮细胞的浓度为1.5×10⁶个/ml、

干细胞因子的浓度为100μg/ml、

黄芪的浓度为150mg/L、

枸橼酸钠的质量分数为3.8％、

岩藻多糖的浓度为50μg/mL、

和Y-27632的浓度为30μM。

7.一种如权利要求1～6任意一项所述的用于治疗肝衰竭的干细胞制剂的制备方法，其特征在于，

获取间充质干细胞的过程包括以下步骤：

无菌环境下，取脐带，用含有双抗的PBS溶液清洗，剪切成组织块，并用培养基湿润所述组织块；然后，添加间充质干细胞生长培养基进行培养，每2～4天更换间充质干细胞生长培养基；当细胞贴壁生长达70％以上汇合后，弃组织块，胰酶消化，待细胞间隙增大，胞质回缩，用血清终止消化，制成单细胞悬液，离心后重悬细胞，按1：2～1：3的比例进行传代培养至收获第3～5代中任一代间充质干细胞。

获取血管内皮细胞的过程包括以下步骤：

取所述第3～5代中任一代间充质干细胞，以(3～6)×10⁵个/皿的密度接种，加入诱导培养基诱导培养至间充质干细胞转化为原代血管内皮细胞，再对所述原代血管内皮细胞进行传代扩增培养至收获第3～5代中任一代血管内皮细胞。

8.根据权利要求7所述的用于治疗肝衰竭的干细胞制剂的制备方法，其特征在于，所述诱导培养基中添加有40～60μg/L的血管内皮生长因子和5～15μg/L的人碱性成纤维生长因子。

9.根据权利要求1～6任一项所述的干细胞制剂在制备治疗肝衰竭的药物中的应用。