[发明专利]烟叶中角鲨烯的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及烟叶中成分的检测技术领域，更具体地，涉及一种基于高效液 相色谱检测烟叶中所含角鲨烯的方法。

背景技术

角鲨烯最初是从鲨鱼的肝油中发现的，1914年被命名为Squalene，其化学 名称为2,6,10,15,19,23--六甲基--2,6,10,14,18,22--二十四碳六烯，属开链三萜类化 合物。角鲨烯具有提高人体内超氧化物歧化酶(SOD)活性、增强机体抗氧化性和 免疫能力、改善性功能、抗衰老、抗疲劳、抗肿瘤等多种生理功能,是一种无毒 性的具有防病治病作用的生物活性物质。最近研究发现角鲨烯对人体还具有解 毒作用，可移除组织中的脂溶性毒素。2014年4月，国家烟草专卖局下发“关 于”加快卷烟降焦减害技术成果推广应用的通知(国烟办综[2014]218号)，提 出要加大卷烟减害技术重大专项研究成果的应用推广力度，要采取针对性技术 措施加快卷烟降焦减害步伐。

本申请人在烟叶天然抗氧化剂角鲨烯的生态累积与减害的研究工作，发现 角鲨烯可以选择性地降低烟气中苯并芘、巴豆醛、NH3等有害成分，降低卷烟 危害指数，同时角鲨烯具有清除烟气中的气相和固相自由基功能由于角鲨烯具 有独特生理功能，目前开发利用角鲨烯已成为科技界研究的热点。

但是，目前国内外还没有可参考的烟叶中角鲨烯定性和定量的检测方法， 因此，在烟草行业建立烤烟中角鲨烯定性和定量的检测方法具有前瞻性，也是 十分必要的。

发明内容

本发明要解决的技术问题是填补现有烟叶中角鲨烯的检测技术不足，提供 一种烟叶中角鲨烯的检测方法。

本发明的技术方案通过以下技术方案予以实现：

本发明以甲醇和乙腈为流动相，采用填有粒径5μm的高效固定相的柱色谱 分离技术，优化高效液相色谱检测条件，将经本发明方法前处理后的样品注入 高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，检测角鲨烯的吸收值，采 用外标法，根据吸收峰面积计算其含量；

具体地，提供一种烟叶中角鲨烯的检测方法，包括以下步骤：

S1.样品前处理得到样品液，在经过硅胶净化处理后得到样品待测液；

S2.配制标准溶液，建立标准曲线；

S3.检测：吸取样品待测液注入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收 检测器检测角鲨烯；

S4.采用外标法，根据吸收峰面积计算其含量；

其中，步骤S1所述样品前处理包括以下步骤：

S11.烟叶切丝，以三氯甲烷作为提取溶剂，经索氏提取得到提取液；

S12.将提取液经甲醇：水的体积比为70:30的萃取剂进行萃取，收集萃取液， 进行旋转蒸发至近干，再用乙腈溶解，过0.22μm有机系膜，收集滤液得到样品 液；

S13.将步骤S12所得样品液过小柱净化处理，采用湿法装柱，小柱材料为 0.06gPSA(N-丙基乙二胺固相吸附剂)和适量无水硫酸钠；

步骤S3所述检测的条件为：

Agilent1100高效液相色谱仪HPLC配紫外检测器；

色谱柱：C18，5μm，4.6×250mm；

柱温：30℃；

流动相类型：甲醇∶乙腈，体积比为75/25；

流动相流速：1mL/min；

检测波长为：210nm；

进样量：10μL。

优选地，步骤S2所述配制标准溶液的方法是准确称取0.1g角鲨烯标准品， 精确至0.0001g，用乙腈溶解后定容至100mL配制成1000mg/L的角鲨烯标准 溶液，充分振荡摇匀。

优选地，步骤S2所述角鲨烯标准曲线的建立的方法是：采用系列稀释法， 分别配制成浓度为0.002、0.01、0.05、0.2、0.5mg/mL的角鲨烯标准溶液于高 效液相色谱进样检测；以进样浓度为横坐标，峰面积为纵坐标建立标准曲线， 求出角鲨烯浓度与相应峰面积的线性回归方程。

优选地，步骤S11在加入三氯甲烷之前，先对烟丝进行涡旋处理，所述涡 旋处理是涡旋1min，静止10min。

优选地，所述涡旋处理的条件为2000r/min。

优选地，步骤S11所述三氯甲烷的用量按照与烟丝的比例为5.0g烟丝： 200mL三氯甲烷确定。

优选地，步骤S11所述所述索氏提取的条件为40℃水浴，回流9个小时。