[发明专利]与肝癌预后相关的血清miRNA标志物及其检测试剂盒的应用

权利要求书

1.一种肝癌预后标记物在制备用于评估肝癌预后危险度的肝癌血清miRNA检测试剂盒的应用，其特征在于，所述标记物为miR-29a-3p和miR-192-5p的组合，所述miR-29a-3p序列信息如SEQ ID NO.1所示；miR-192-5p序列信息如SEQ ID NO.2所示。

2.如权利要求1所述的一种肝癌预后标记物在制备用于评估肝癌预后危险度的肝癌血清miRNA检测试剂盒的应用，其特征是，基于所述标记物的预后风险模型公式为：Y＝2.19*A_{BCLC stage}+1.45*B_miR-192-5p+1.81*C_miR-29a-3p；

A_{BCLC stage}取值0或1，0代表为早期，1代表为晚期；

B_miR-192-5p取值0或1，0代表miR-192-5p为低表达，表达量2^-△△CT2.24；1代表其为高表达，表达量2^-△△CT≥2.24；

C_miR-29a-3p取值0或1，0代表miR-29a-3p为低表达，表达量2^-△△CT1.37；1代表其为高表达，表达量2^-△△CT≥1.37；

当Y值1.81时为患者生存风险低危，Y值1.81时，患者为生存风险中高危。

3.如权利要求1所述的一种肝癌预后标记物在制备用于评估肝癌预后危险度的肝癌血清miRNA检测试剂盒的应用，其特征是：试剂盒包括用于配制反转录反应体系的试剂、用于配制qPCR反应体系的试剂和用于配制内参体系的试剂；其中，用于配制反转录反应体系的试剂至少包括分别针对miR-29a-3p、miR-192-5p和线虫cel-miR-39的特异性茎环法反转录引物液；用于配制qPCR反应体系的试剂至少包括分别针对miR-29a-3p、miR-192-5p和线虫cel-miR-39的正向引物液和反向通用引物液；用于配制内参体系的试剂包括内参cel-miR-39液，cel-miR-39的序列信息如SEQ ID NO.3所示。

4.如权利要求3所述的一种肝癌预后标记物在制备用于评估肝癌预后危险度的肝癌血清miRNA检测试剂盒的应用，其特征是：所述用于配制反转录反应体系的试剂还包括反转录酶液、dNTP混合液、核糖核酸酶抑制剂液、反转录缓冲液和无核酸酶纯水。

5.如权利要求3所述的一种肝癌预后标记物在制备用于评估肝癌预后危险度的肝癌血清miRNA检测试剂盒的应用，其特征是：所述反转录反应体系的总体积为25μl；其中，总RNA样品2μl、特异性茎环法反转录引物液2μl、反转录酶液0.5μl、dNTP混合液2μl、核糖核酸酶抑制剂液0.5μl、反转录缓冲液5μl和无核酸酶纯水13μl；所述总RNA样品中含有内参cel-miR-39液。

6.如权利要求5所述的一种肝癌预后标记物在制备用于评估肝癌预后危险度的肝癌血清miRNA检测试剂盒的应用，其特征是：所述总RNA样品的制备，是在抽提250μl血清总RNA过程中加入的体积为2μl的内参cel-miR-39液，所述内参cel-miR-39液使用浓度为0.05pmol/μl。

7.如权利要求3所述的一种肝癌预后标记物在制备用于评估肝癌预后危险度的肝癌血清miRNA检测试剂盒的应用，其特征是：用于配制qPCR反应体系的试剂还包括SYBR Green混合液、ROX Reference Dye II液和纯水。

8.如权利要求7所述的一种肝癌预后标记物在制备用于评估肝癌预后危险度的肝癌血清miRNA检测试剂盒的应用，其特征是：所述qPCR反应体系的总体积为20μl；其中，所述SYBRGreen混合液的体积是9μl，所述正向引物液的体积是0.8μl，所述反向通用引物液的体积是0.8μl，所述ROX Reference Dye II液0.4μl，cDNA模板是4μl，其余是纯水；所述正向引物液的使用浓度为5μM，所述反向通用引物液的使用浓度为5μM；所述cDNA模板是所述反转录反应体系反应后的产物。