[发明专利]一种新型隐球菌荚膜多糖抗原免疫检测试剂盒及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种新型隐球菌荚膜多糖抗原免疫检测试剂盒，包括：GXM包被的酶标载体、抗GXM多 克隆酶标抗体、GXM标准品，其特征在于，所述的GXM是从新型隐球菌培养液中提取纯化得到 的，所述的提取为将酸化后的新型隐球菌培养液加入乙醇沉淀得到GXM粗提物，所述的纯化 方法为亲和免疫层析法。

2.如权利要求1所述的新型隐球菌荚膜多糖抗原免疫检测试剂盒，其特征在于，所述的 抗GXM多克隆抗体，是用GXM作为免疫原免疫动物得到的血清进行分离纯化得到的；所述纯 化方法为饱和硫酸铵盐析沉淀法和/或亲和层析法。

3.如权利要求1所述的新型隐球菌荚膜多糖抗原免疫检测试剂盒，其特征在于，所述的 GXM包被的酶标载体，由以下方法制备得到：

①用包被缓冲液稀释GXM得到GXM包被液，加入酶标板孔中进行包被；

②向步骤①得到的酶标板孔中加入封闭液进行封闭；

③将步骤②得到的酶标板弃去封闭液，孵育，得到GXM包被的酶标载体。

4.如权利要求1所述的新型隐球菌荚膜多糖抗原免疫检测试剂盒，其特征在于，所述的 酶标载体为微孔板、塑料管；和/或，所述的用于标记的酶为辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶。

5.如权利要求1所述的新型隐球菌荚膜多糖抗原免疫检测试剂盒，其特征在于，所述的 GXM标准品至少有0-100ng/mL范围内的3种不同浓度。

6.如权利要求1所述的新型隐球菌荚膜多糖抗原免疫检测试剂盒，其特征在于，所述的 新型隐球菌荚膜多糖抗原免疫检测试剂盒还包括：样本处理液、浓缩洗液、样本稀释液、底 物溶液和终止液，所述的浓缩洗液为：含0.4％-1.0％吐温的磷酸盐缓冲液；和/或，

所述的样本稀释液为：人工脑脊液或人工血清；和/或，

所述的底物溶液为：TMB、OPD、OT、ABTS或p-NPP；和/或，

所述的终止液为：1-20mol/L的硫酸溶液。

7.如权利要求6所述的新型隐球菌荚膜多糖抗原免疫检测试剂盒，特征在于，所述的样 本处理液选自以下溶液：pH2.0-10.0的蛋白变性溶液；pH4.0-4.8的0.05-0.2mol/L的EDTA 溶液；pH2.2-2.8的0.07-0.20mol/L的甘氨酸-HCL溶液；pH8.0-9.0的0.05-15mg/mL的链酶 蛋白酶；pH8.5-1.0的0.01-0.10mol/L的SDS溶液或pH7.2-8.0的1-8mol/L的尿素。

8.如权利要求1-7任一项所述的新型隐球菌荚膜多糖抗原免疫检测试剂盒的制备方 法，其具体步骤如下：

(1)制备酶标载体

①用包被缓冲液稀释GXM，得到GXM包被液，加入酶标板孔中进行包被；

②向步骤①得到的酶标板孔中加入封闭液进行封闭；

③将步骤②得到的酶标板弃去封闭液，孵育，得到GXM包被的酶标载体；

(2)GXM标准品的制备

稀释GXM抗原，制备GXM标准品；

(3)抗GXM多克隆酶标抗体溶液的配制：

用于标记的酶为辣根过氧化物酶，采用过碘酸盐氧化法进行抗GXM多克隆酶标抗体的 制备；或，用于标记的酶为碱性磷酸酶，采用戊二醛交联法进行抗GXM多克隆酶标记抗体的 制备；

将抗GXM多克隆酶标抗体用酶结合物稳定剂稀释制得抗GXM多克隆酶标抗体溶液。