[发明专利]赋予植物黄萎病抗性的LRK2基因及其应用在审
| 申请号： | 201610112767.2 | 申请日： | 2016-02-29 |
| 公开（公告）号： | CN105586348A | 公开（公告）日： | 2016-05-18 |
| 发明（设计）人： | 刘廷利;顾周航;周雪平;张保龙;杨郁文;陈天子;凌溪铁;王金彦 | 申请（专利权）人： | 江苏省农业科学院;浙江理工大学 |
| 主分类号： | C12N15/29 | 分类号： | C12N15/29;C12N15/82;A01H5/00 |
| 代理公司： | 南京经纬专利商标代理有限公司 32200 | 代理人： | 张素卿 |
| 地址： | 210014 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 赋予 植物 黄萎病 抗性 lrk2 基因 及其 应用 | ||
1.赋予植物黄萎病抗性的LRK2基因,其序列为SEQIDNO.1。
2.权利要求1所述LRK2基因的应用。
3.权利要求1所述LRK2基因在植物黄萎病抗性中的的应用。
4.权利要求1所述LRK2基因在拟南芥植物黄萎病抗性中的的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，包括：
1)LRK2基因的克隆以及植物表达载体的构建
以陆地棉品种奥3503的cDNA为模板，用引物
P1:5’-TGCTCTAGAATGGCATCTGTAATGAGTAA-3’，
P2:5’-CGCGGATCCTCACAGATTGGATGTTGTG-3’
扩增得到2016bp片段，将该片段命名为LRK2，PCR产物纯化后用XbaI/BamHI酶切，连接 到pCambia2301载体，测序后成功构建的重组载体命名为pCambia2301:LRK2；
2)转基因植株的获得
将步骤1)中构建好的pCambia2301:LRK2质粒用冻融法转化农杆菌LBA4404，用蘸花法 转化拟南芥，当代的拟南芥植株为T0代，收获的种子为T1代，T1代种子在含25mg/mL卡那抗 生素的1/2MS培养基上筛选，获得候选的阳性T1植株，分别在DNA和RNA水平上检测目的基因 是否转入以及是否成功表达：
用引物
P3:5’-CAGGATCTCAGAATGCCGGA-3’
P4:5’-TGCCCTTAATTCATCTGCGC-3’
扩增候选的阳性T1代植株的DNA和cDNA进行PCR鉴定，在DNA和cDNA水平均能扩增获得 821bp大小片段的T1植株则为成功转化LRK1的阳性转基因植株。
6.权利要求5所述应用中构建的重组载体pCambia2301:LRK2。
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