[发明专利]普通生酮基古龙酸菌速生型产酸菌株的高通量筛选方法

权利要求书

1.一种普通生酮基古龙酸菌速生型产酸菌株的高通量筛选方法，其特征在于它包括如 下步骤：

(1)以普通生酮基古龙酸菌为出发菌株进行诱变处理，获取经诱变处理的菌体悬浮液；

(2)将经过诱变处理的菌体悬浮液稀释后涂布于含有一定剂量指示剂的鉴别用固体培 养基平板上，31±3℃静置培养48～96h；

(3)从鉴别用固体培养基平板上生长出的普通生酮基古龙酸菌单菌落中挑取在静置培 养期内周围培养基出现变色圈且颜色由蓝绿变为黄色的单菌落，分别接种于一支装有含有 一定剂量指示剂的鉴别用种液培养基的离心管中，每N支离心管组成一个离心管组，作为一 个培养单元置于摇床中，31±3℃振荡培养，期间根据离心管中种液的颜色变化，挑取在较 短时间内颜色由蓝绿变为黄色的离心管中种液作为高产酸种液；

(4)将挑取的高产酸种液稀释后涂布于分离培养基平板上，31±3℃静置培养48～72h， 挑取饱满个大的单菌落进行扩大培养，即得到纯化高产的普通生酮基古龙酸菌速生型产酸 菌株；

所述鉴别用固体培养基的组成为：山梨糖10～20g/L、酵母膏2～6g/L、玉米浆2～6g/L、 蛋白胨5～10g/L、尿素0.5～2g/L、MgSO₄·7H₂O0.05～0.2g/L、KH₂PO₄0.5～2g/L、CaCO₃0.5～2g/L、指示剂0.01～0.1g/L、琼脂10～25g/L，pH7.0～7.5；

所述鉴别用种液培养基的组成为：山梨糖10～20g/L、酵母膏2～6g/L、玉米浆2～6g/L、 蛋白胨5～10g/L、尿素0.5～2g/L、MgSO₄·7H₂O0.05～0.2g/L、KH₂PO₄0.5～2g/L、指示剂 0.005～0.05g/L，pH6.8～7.2；

所述鉴别用固体培养基和鉴别用种液培养基中加入的指示剂是溴百里酚蓝，或加有适 量溴甲酚紫的溴百里酚蓝、溴甲酚紫混合物，或加有适量甲基红的溴百里酚蓝、甲基红混合 物，或加有适量溴甲酚紫和甲基红的溴百里酚蓝、溴甲酚紫、甲基红混合物。

2.如权利要求1所述的普通生酮基古龙酸菌速生型产酸菌株的高通量筛选方法，其特 征在于：各步骤所选培养基培养温度均为31±2℃。

3.如权利要求1所述的普通生酮基古龙酸菌速生型产酸菌株的高通量筛选方法，其特 征在于：步骤(3)所选用离心管为2mL圆底离心管。

4.如权利要求1所述的普通生酮基古龙酸菌速生型产酸菌株的高通量筛选方法，其特 征在于：步骤(3)将接种后的、装有鉴别用种液培养基的离心管，每N支组成一个离心管组， 作为一个培养单元置于摇床中，31±3℃振荡培养时间为40h。

5.如权利要求3所述的普通生酮基古龙酸菌速生型产酸菌株的高通量筛选方法，其特 征在于：步骤(3)将接种后的、装有鉴别用种液培养基的离心管，每N支组成一个离心管组， 作为一个培养单元置于摇床中，31±2℃振荡培养时间为40h。

6.如权利要求5所述的普通生酮基古龙酸菌速生型产酸菌株的高通量筛选方法，其特 征在于其应用的鉴别用固体培养基：山梨糖15g/L、酵母膏3g/L、玉米浆3g/L、蛋白胨8g/L、 尿素1g/L、MgSO₄·7H₂O0.1g/L、KH₂PO₄1g/L、CaCO₃1g/L、指示剂0.02g/L、琼脂15g/L，pH 7.0～7.5。

7.如权利要求6所述的普通生酮基古龙酸菌速生型产酸菌株的高通量筛选方法，其特 征在于其应用的鉴别用种液培养基：山梨糖15g/L、酵母膏3g/L、玉米浆3g/L、蛋白胨10g/L、 尿素1g/L、MgSO₄·7H₂O0.1g/L、KH₂PO₄1g/L、指示剂0.01g/L，pH6.8～7.2。