[发明专利]反映男性精子活力的精浆piRNA标志物或其组合及应用

权利要求书

1.一种与男性精子活力相关的piRNA标志物或其组合，其特征在于包括 下列piRNA中的任意一种或多种：DQ570956、DQ571813、DQ575659和DQ575661； 其中，所述的男性精子活力选自弱精症；DQ570956核苷酸序列如SEQIDNO. 1所示，DQ571813核苷酸序列如SEQIDNO.2所示，DQ575659核苷酸序列如 SEQIDNO.3所示，DQ575661核苷酸序列如SEQIDNO.4所示。

2.权利要求1所述的与男性精子活力相关的piRNA标志物或其组合在制 备检测男性精子活力的试剂中的应用。

3.权利要求1所述的与男性精子活力相关的piRNA标志物或其组合在制 备弱精症诊断试剂中的应用。

4.定量检测权利要求1所述的与男性精子活力相关的piRNA标志物或其 组合的试剂在制备检测男性精子活力的试剂中的应用；所述的定量检测权利 要求1所述的与男性精子活力相关的piRNA标志物或其组合的试剂优选权利 要求1所述的与男性精子活力相关的piRNA标志物或其组合的TaqMan探针和 引物。

5.定量检测权利要求1所述的与男性精子活力相关的piRNA标志物或其 组合的试剂在制备弱精症诊断试剂中的应用；所述的定量检测权利要求1所 述的与男性精子活力相关的piRNA标志物或其组合的试剂优选权利要求1所 述的与男性精子活力相关的piRNA标志物或其组合的TaqMan探针和引物。

6.一种用于检测男性精子活力的试剂盒，其特征在于包含TaqMan探针 实时荧光定量PCR法检测DQ570956、DQ571813、DQ575659和DQ575661的探 针和引物。

7.一种用于诊断男性弱精症的试剂盒，其特征在于包含TaqMan探针实 时荧光定量PCR法检测DQ570956、DQ571813、DQ575659和DQ575661的探针 和引物。

8.一种预测弱精症的方法，其特征在于包含以下步骤：

(1)收集精浆样本，包括精子活力正常的有生育能力的男性以及精子活 力弱的生殖功能障碍的男性的精浆样本，并提取总RNA；

(2)逆转录成cDNA，采用TaqMan探针实时荧光定量PCR法对DQ570956、 DQ571813、DQ575659和DQ575661四种piRNA进行检测，测算出精子活力低下 患者与正常生育男性精浆中四种piRNA的绝对含量；

(3)经数学分析过程计算RiskScore从而评估精子活力与piRNA表达 水平之间的关系，使用的公式如下：

RiskScore_i＝∑ⁿ_j＝1W_j·S_ij

在以上公式中，每个piRNA的“s”是以正常对照组5％的下限为参考值， 即低于正常5％下限记为1，否则为0。“s_ij”是piRNAj相对于samplei获得 的数值，“W_j”是piRNAj的加权值。通过以上公式，即可以给病人i打分，获 得其危险系数评分RiskScore_i。然后根据ROC曲线找到一个合适的Cut-off 值，然后将计算得到的RiskScore_i分值与Cut-off值比较，分值大于Cut-off 值提示该样本危险系数高，精子活力不足，该样本来源的男子患有弱精症； 分值小于Cut-off值提示该样本危险系数低，精子活力正常，该样本来源的 男子未患弱精症。从而使用危险系数评分法，将建立男性不育与piRNA表达 水平之间的联系，评估男性精子活力，评估受测试样本的危险性，进而特异 性检测或预测弱精症男性生殖功能障碍疾病。