[发明专利]一种基于聚合物发光点的免疫探针及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种基于聚合物发光点的免疫探针的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)聚合物点的合成及修饰：分别将聚合物CN-PPV和PSMA溶解于THF中，得到CN-PPV溶液和PSMA溶液；将CN-PPV溶液、PSMA溶液和THF混合，得到均相溶液，其中，在均相溶液中，CN-PPV和PSMA按质量比3：1～8：1配比；再将均相溶液加入到处于超声震荡状态下的超纯水中，超声震荡；接着通过氮气除去THF，浓缩，过滤，得到PDs水溶液；

(2)亚胺硫磷探针的合成：将PDs水溶液、PBS和EDC混匀，得到混合液体A，其中，PDs和EDC按质量比1：2～1：6配比；将混合液体A和亚胺硫磷抗体混合，振荡反应，离心过滤，得到基于聚合物发光点的免疫探针，其中，亚胺硫磷抗体的加入量按亚胺硫磷抗体和PDs的质量比为5：(2～8)配比；

步骤(2)中所述的PBS溶液为pH＝5～9、1M的PBS；

步骤(2)中所述的混合液体A中PDs的浓度为0.038～0.04mg/mL；

步骤(2)中所述的混合液体A中EDC的浓度为0.15～0.16mg/mL；

步骤(2)中所述的振荡反应的条件为于20～38℃振荡反应1～4h。

2.根据权利要求1所述基于聚合物发光点的免疫探针的制备方法，其特征在于：

步骤(1)中所述的均相溶液中CN-PPV和PSMA为按质量比为5：1配比；

步骤(1)中所述的均相溶液中CN-PPV的浓度为0.048～0.050mg/mL；

步骤(1)中所述的均相溶液中PSMA的浓度为0.008～0.010mg/mL；

步骤(1)中所述的超纯水的用量按超纯水的体积为均相溶液体积的1.9～2倍体积计算；

步骤(1)中所述的超声震荡的功率为160～200W；

步骤(1)中所述的超声震荡的时间为10min；

步骤(1)中所述的浓缩的条件为于70～120℃的温度下进行浓缩；

步骤(1)中所述的过滤为通过0.2μm的过滤膜过滤。

3.根据权利要求1所述基于聚合物发光点的免疫探针的制备方法，其特征在于：

步骤(2)中所述的混合液体A中PDs和EDC为按质量比1：4配比；

步骤(2)中所述的亚胺硫磷抗体的加入量为按亚胺硫磷抗体和PDs的质量比为5：(2～6)配比。

4.根据权利要求3所述基于聚合物发光点的免疫探针的制备方法，其特征在于：

所述的PBS溶液pH＝7.3、1M的PBS；

所述的亚胺硫磷抗体的加入量为按亚胺硫磷抗体和PDs的质量比为5：4配比；

所述的振荡反应的条件为25～37℃振荡反应1.5～2.5h。

5.一种基于聚合物发光点的免疫探针，其特征在于：通过权利要求1～4任一项所述的制备方法得到。

6.权利要求5所述的基于聚合物发光点的免疫探针的应用，其特征在于：将所述基于聚合物发光点的免疫探针用于定性检测亚胺硫磷、半定量或定量检测亚胺硫磷。

7.一种定性及半定量原位检测亚胺硫磷的方法，其特征在于包括如下步骤：

I、将权利要求5所述的基于聚合物发光点的免疫探针涂布或喷射于待检测物体上；

II、晾干后，用水淋洗后于紫外灯下观察；

III、出现橙色荧光，表明待检测物体上含有亚胺硫磷；

IV、根据橙色荧光强度能进行半定量检测。