[发明专利]一种基于聚合物发光点的免疫探针及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种基于聚合物发光点的免疫探针及其制备方法与应用。本发明通过CN‑PPV和PSMA反应，制备得到PDs水溶液；接着将PDs水溶液、PBS和EDC混匀，混匀，得到混合液体A；将混合液体A和亚胺硫磷抗体混合反应，得到基于聚合物发光点的免疫探针。该免疫探针能特异性识别亚胺硫磷，因此可用其定性检测亚胺硫磷、半定量或定量检测亚胺硫磷。本发明提供的定性和半定量检测方法为原位可视化检测方法；本发明提供的定量检测方法灵敏度高，特异性强，可以进行高灵敏度定量检测。

技术领域

本发明涉及检测技术领域，特别涉及一种基于聚合物发光点的免疫探针及其制备方法与应用。

背景技术

农药对食品、环境及生态的影响越来越受到人们的关注。农残样品具有组分复杂、分析物含量低的特点，对其含量进行测定是一项重要且具有挑战的工作。由于农残含量与人们的日常生活紧密相关，建立高灵敏度、现场可视化的农残检测方法是未来的发展方向之一。

亚胺硫磷是目前常用的一种有机磷农药，最常用的检测方法主要有高效液相色谱(HPLC)、液相色谱-质谱(LC-MS)，但通常需要经过繁杂的样品前处理，所需仪器成本高，需专业人员操作。酶联免疫分析法(ELISA)也用来测定亚胺硫磷，如2008年Liang等根据硫代磷酸酯半族衍生合成半抗原制备出多克隆通用抗体，对包括亚胺硫磷在内的8种有机磷农药进行了检测，其中亚胺硫磷的IC50为159.7ng/mL。2013年Liu将电化学化学发光法和ELISA结合运用检测亚胺硫磷，测得亚胺硫磷的IC50为8.56mg/L。但酶联免疫法步骤多，酶存在易失活的缺点，检测限不高。近几年表面增强拉曼光谱法受到关注，2014年Fan基于多克隆抗体研究，在基底表面修饰金原子后，用拉曼光谱对苹果样品中亚胺硫磷残留进行快速检测。2015年Pan使用银胶体作为SERS基底，用拉曼光谱测定茶叶、苹果、橘子中农药残留。拉曼光谱法需要用金、银等贵金属包覆基底，成本较高，同样需要大型贵重仪器检测。上述常用的检测方法都难以适用现场检测及可视化检测。

荧光探针常用来可视化原位检测，量子点是受到关注的一类优良探针，广泛应用在定量检测和成像中。但传统的量子点主要是镉基量子点，存在重金属污染，因此制备和应用环境友好材料的探针十分必要。除了碳点、硅点外，近年来用有机聚合物作为原料合成的聚合物点，因其兼具有机荧光染料和量子点的特性，越来越受到关注。聚合物纳米颗粒粒径较小、荧光强度高、抗光漂白能力强。为了使探针具有识别特定分析物的功能，常常选用适配体、抗体等来修饰探针。

发明内容

本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种基于聚合物发光点的免疫探针的制备方法。

本发明的另一目的在于提供通过上述制备方法得到的基于聚合物发光点的免疫探针。

本发明的再一目的在于提供所述基于聚合物发光点的免疫探针的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种基于聚合物发光点的免疫探针的制备方法，包括如下步骤：

(1)聚合物点(PDs)的合成及修饰：分别将聚合物CN-PPV(聚苯撑乙烯衍生物)和PSMA(苯乙烯-马来酸酐共聚物)溶解于THF(四氢呋喃)中，得到CN-PPV溶液和PSMA溶液；将CN-PPV溶液、PSMA溶液和THF混合，得到均相溶液，其中，在均相溶液中，CN-PPV和PSMA按质量比3：1～8：1配比；再将均相溶液加入到处于超声震荡状态下的超纯水中，超声震荡；接着通过氮气除去THF，浓缩，过滤，得到PDs水溶液；

(2)亚胺硫磷探针的合成：将PDs水溶液、PBS和EDC(碳二亚胺)混匀，得到混合液体A，其中，PDs和EDC按质量比1：2～1：6配比；将混合液体A和亚胺硫磷抗体混合，振荡反应，离心过滤，得到基于聚合物发光点的免疫探针，其中，亚胺硫磷抗体的加入量按亚胺硫磷抗体和PDs的质量比为5：(2～8)配比。

步骤(1)中所述的CN-PPV溶液的浓度优选为1.0mg/mL。