[发明专利]一种快速提取植物组织总RNA的方法

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种快速提取植物组织总RNA的方 法。

背景技术

从植物组织中提取纯度高、完整性好的RNA是进行基因克隆，基因表达调 控等植物分子生物学研究的必要前提；在提取RNA的过程中，不仅会受到RNase 的污染，同时也会受到植物组织中丰富的糖类、多酚，蛋白质等物质的干扰， 从而造成分离的RNA杂质多，纯度低，难以达到后续实验的要求；目前大多数 植物组织中提取RNA的方法用时过长，工作效率低下，而TRIZOL等商业试剂 盒，虽然快速，但是成本较高，其质量和效果也不稳定。

发明内容

针对于现有技术中存在的上述问题，本发明的目的是提供一种快速提取植 物组织总RNA的方法，该方法提取的RNA纯度高，提取时间短，大大提高了 工作效率。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

提供一种快速提取植物组织总RNA的方法，包括以下步骤：

1)研钵洗净后，用酒精进行灼烧，再用液氮迅速预冷，将交联聚乙烯基吡 咯烷酮和植物组织按照1:1～1:5(w/w)的比例置于上述研钵中，并在液氮中研 磨成粉末；取0.1-0.3g左右的上述粉末置于2ml离心管中，加入10μlβ-巯基乙 醇和1ml预热CTAB提取液，震荡混匀，于55-68℃下水浴20-30分钟，冷却至 室温；

2)在步骤1)所述的离心管中直接加入1ml氯仿，充分震荡后，常温下， 12000rpm离心5min；取上清，加入等体积氯仿，充分震荡后，4℃，12000rpm 离心10min，取上清，按照同样的条件重复抽提一次；

3)取上清，加入等体积8MLiCl，常温下沉淀1-2h，12000rpm离心10min， 彻底弃上清，保留沉淀；

4)在上述沉淀中加入75％乙醇浸泡5-10min，上下颠倒洗涤，8000rpm离 心5min，彻底弃上清，重复洗涤1-2次，所得沉淀于室温下风干10-15min(不 要有酒精残留)，再加入20-30μlDEPC处理水溶解，-20℃保存。

所述交联聚乙烯基吡咯烷酮和植物组织的质量比为1:1(w/w)。

所述植物组织为植物的根、茎、叶、花、果实或种子。

所述CTAB提取液配方为：3％CTAB，2％PVP，200mMTris-HCl(pH8.0)， 50mMEDTA，1.4MNaCl。

本发明首先将研钵用酒精烧后并用液氮快速预冷，加入特定比例的交联聚 乙烯基吡咯烷酮和植物组织于研钵中，用液氮充分研磨后，再加入预热的CTAB 提取液和β-巯基乙醇进行细胞裂解，然后经氯仿抽提，用等体积的高浓度LiCl 快速沉淀得到总RNA。该方法能够有效控制RNase对RNA的降解、酚类物质 以及多糖的干扰，制得高纯度的RNA，并且用时短，成本低，效率高，所提取 的RNA纯度和完整性高，能够满足对高纯度的RNA的需求，具有巨大的应用 前景。

附图说明

图1为采用本发明实施例1的方法提取草莓不同组织总RNA的凝胶电泳图；

图2为使用本发明实施例1提取的总RNA为模板扩增草莓Actin基因的PCR凝 胶电泳图；

图3为使用本发明实施例2的方法提取黑莓、草莓、柑橘、猕猴桃总RNA的凝 胶电泳图。

图4为使用本发明实施例2的方法提取月季、唐菖蒲和芥蓝总RNA的凝胶电泳 图。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明具体实 施例及相应的附图对本发明技术方案进行清楚、完整地描述。

实施例1

将研钵洗净，用酒精进行灼烧，然后液氮迅速冷却，加入0.2g的交联聚乙 烯基吡咯烷酮和0.2g草莓叶片，在液氮环境中研磨成粉末；

取0.11g上述研磨的粉末，放置于2ml离心管中，加入10μlβ-巯基乙醇和 1ml预热好的CTAB提取液，震荡混匀，于65℃下水浴20-30分钟，冷却至室 温；

在上述离心管中再加入1ml氯仿，充分震荡后，常温下，12000rpm离心5min； 取上清，加入等体积氯仿，充分震荡后，4℃，12000rpm离心10min；取上清， 加入等体积氯仿，充分震荡后，4℃，12000rpm离心10min；