[发明专利]一种甘蓝型油菜的fad2基因的基因型测定方法

权利要求书

1.一种含有高油酸的甘蓝型油菜的测定方法，含有以下步骤：

测定油酸的fad2基因的第41位到50位核苷酸的碱基为AAAAGTCTGA，第231位到245位核苷酸的碱基为TCCCTCACCCTCTCT，则所述甘蓝型油菜的fad2基因属于fad2-I型；或测定油酸的fad2基因的第41位到50位核苷酸的碱基为GCTCCCCCGG，第231位到245位核苷酸的碱基缺失，则所述甘蓝型油菜的fad2基因属于fad2-II型。

2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于包含以下步骤：

(1)提取甘蓝型油菜的fad2基因；

(2)对步骤(1)获得的fad2基因进行PCR扩增；

(3)对步骤(2)制备得到的扩增产物测序，得到所述fad2基因的核苷酸的碱基序列；

(4)测定油酸的fad2基因的第41位到50位核苷酸的碱基为AAAAGTCTGA，第231位到245位核苷酸的碱基为TCCCTCACCCTCTCT，所述甘蓝型油菜的fad2基因属于fad2-I型；

或测定油酸的fad2基因的第41位到50位核苷酸的碱基为GCTCCCCCGG，第231位到245位核苷酸的碱基缺失，则所述甘蓝型油菜的fad2基因属于fad2-II型。

3.根据权利要求2所述的测定方法，其特征在于，测定油酸的fad2基因编码出连续蛋白，则所述甘蓝型油菜的fad2基因属于fad2-I型；

或者测定油酸的fad2基因编码出不连续蛋白，则所述甘蓝型油菜的fad2基因属于fad2-II型。

4.根据权利要求2所述的测定方法，其特征在于，步骤(2)中，fad2基因的PCR扩增，包括以下步骤组成：

(1)取甘蓝型油菜的fad2基因的基因组DNA或者cDNA 2μL，上下游引物各0.5μL，10mMdNTPs 0.8μL，5U/μL的ES Taq DNAPolymerase 0.8μL，10×Polymerase Buffer 3μL，无菌水体积补足至30μL，备用；

(2)将步骤(1)制备的混合物于94℃保持4分钟,94℃保持40秒,60℃保持40秒,72℃保持100秒，进行35个循环,然后于72℃保持7分钟；

PCR扩增的引物序列：Bnfad2-F:ATGGGTGCAGGTGGAAGAATGCAAG；

Bnfad2-R:TCATAACTTATTGTTGTACCAGAACACACC。

5.权利要求1-4任一项所述的测定方法在检验和判定甘蓝型油菜是否属于高油酸油菜的用途。

6.一种检测甘蓝型油菜fad2基因的基因型的PCR方法，包括：

(1)取甘蓝型油菜的fad2基因的基因组DNA或者cDNA 2μL，上下游引物各0.5μL，10mMdNTPs 0.8μL，5U/μL的ES Taq DNAPolymerase 0.8μL，10×PolymeraseBuffer 3μL，无菌水体积补足至30μL，备用；

(2)将步骤(1)制备的混合物于94℃保持4分钟,94℃保持40秒,60℃保持40秒,72℃保持100秒，进行35个循环,然后于72℃保持7分钟；

PCR扩增的引物序列：

Bnfad2-F:ATGGGTGCAGGTGGAAGAATGCAAG，

Bnfad2-R:TCATAACTTATTGTTGTACCAGAACACACC；

(3)测序；测定油酸的fad2基因的第41位到50位核苷酸的碱基为AAAAGTCTGA，第231位到245位核苷酸的碱基为TCCCTCACCCTCTCT，则所述甘蓝型油菜的fad2基因属于fad2-I型；

或测定油酸的fad2基因的第41位到50位核苷酸的碱基为GCTCCCCCGG，第231位到245位核苷酸的碱基缺失，则所述甘蓝型油菜的fad2基因属于fad2-II型。