[发明专利]一种甘蓝型油菜的fad2基因的基因型测定方法

说明书

本发明提供了一种快速、便捷的划分油酸含量>30％的甘蓝型油菜的fad2基因的基因型的划分方法，具体公开了通过判断甘蓝型油菜的fad2基因的第41位到50位核苷酸的碱基是否为AAAAGTCTGA，第231位到245位核苷酸的碱基是否为TCCCTCACCCTCTCT，来划分甘蓝型油菜fad2基因的基因型的方法。

技术领域

本发明涉及油料作物领域，具体涉及一种检验和判断甘蓝型油菜的fad2基因属于fad2-I型或fad2-II型的测定方法。

背景技术

甘蓝型油菜是三大油菜资源中的重要类型，也是我国南方种植面积广泛的一类典型的油料作物，其脂肪酸组成分为饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸，不饱和脂肪酸对人体的健康，植物的抗逆以及损伤后的修复都具有重要作用。Fad2基因编码油酸脱氢酶，它是植物产生多聚不饱和脂肪酸的关键酶，也是甘蓝型油菜中调控油酸含量的重要酶。目前在双低油菜品种中，油酸是主要脂肪酸，含量最高，其次是亚油酸和亚麻酸。常通过抑制Fad2基因的表达来提高油菜的油酸含量

现有的研究重点往往是通过常规育种和分子育种等手段，提高油菜中的油酸含量，而对相应调控基因的序列特点很少研究，研究基因的序列特点，有针对性的进行相关的下游工作可能会将来产生更优质的材料奠定一定基础。

现有技术通过设计引物，以PCR扩增得到fad2基因的编码序列然后利用DNAMAN6.0软件，分析fad2基因序列的序列特点，找出以不同模板扩增出来的序列差异；通过序列差异，初步明确油菜的油酸含量，用于将来进一步提高油菜油酸的相关研究。为了找到不同材料在基因序列上的差异，需要分别以不同的模板进行基因扩增和测序工作，工作较繁琐。

目前培育高油酸含量的油菜，往往通过杂交或者诱变的方法，杂交所需要的时间长，要打破基因之间的不利连锁有时很困难，诱变对诱变剂的选择，处理时间和浓度以及处理次数等诸多因素都需要不断的实验才能最终确定，因此往往得不到理想的结果，即使得到理想的结果耗时太长；本发明通过对fad2基因进行克隆、测序和序列比较，实现快速分型，针对fad2-I是影响油菜油酸提高的主要限制因素(编码完整的功能蛋白)，后期可以采用构建RNAi载体或者共抑制等方法，使油菜油酸的含量在较短时间内迅速提高

现有的研究重点往往是通过常规育种和分子育种等手段培育品种，测定油菜中的油酸含量，作为特定材料是否是高油酸材料的直接依据，而对相应调控基因的序列特点很少研究，研究基因的序列特点，有针对性的筛选材料进行相关的下游工作，可对选择、培育更优质的高油酸材料奠定重要的基础。

发明内容

本发明提供了一种含有高油酸的甘蓝型油菜的测定方法，含有以下步骤：

测定油酸的fad2基因的第41位到50位核苷酸的碱基为AAAAGTCTGA，第231位到245位核苷酸的碱基为TCCCTCACCCTCTCT，则所述甘蓝型油菜的fad2基因属于fad2-I型；

或测定油酸的fad2基因的第41位到50位核苷酸的碱基为GCTCCCCCGG，第231位到245位核苷酸的碱基缺失，则所述甘蓝型油菜的fad2基因属于fad2-II型；

进一步的，所述测定方法包含以下步骤：

(1)提取甘蓝型油菜的fad2基因；

(2)对步骤(1)获得的fad2基因进行PCR扩增；

(3)对步骤(2)制备得到的扩增产物测序，得到所述fad2基因的核苷酸的碱基序列；

(4)测定油酸的fad2基因的第41位到50位核苷酸的碱基为AAAAGTCTGA，第231位到245位核苷酸的碱基为TCCCTCACCCTCTCT，该油酸的fad2基因编码得到连续蛋白；则所述甘蓝型油菜的fad2基因属于fad2-I型；