[发明专利]瓜蒌皮注射液中化学成分的制备方法及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及药物领域，具体涉及瓜蒌皮注射液中化学成分的制备方法及其用途。

背景技术

瓜蒌(拉丁学名：Trichosantheskirilowii Maxim.)的根(中药名天花粉)、果肉(中药名栝楼实)、果皮(中药名栝楼皮)、种子(中药名栝楼仁)都是有名的中药。其中瓜蒌皮被做成注射液(瓜蒌皮注射液，上海上药第一生化药业有限公司)，凭其优良的品质和疗效，在国内被广泛用于心绞痛，冠心病等。

作为一种常见中药，瓜蒌皮化学成分非常复杂，其真正有效成分至今没有明确，现有文献公开了一些瓜蒌皮化学成分，如：《瓜蒌果皮化学成分》(山东中医药大学博士学位论文，李爱峰，2011)对瓜蒌皮化学成分进行了详尽的综述和分析，在做水溶性化学成分分离时，其选用826型树脂分离得到极性相对较小的化合物；李爱峰等人的专利：一种从瓜蒌皮中分离纯化4种核苷类化学成分的方法(CN103304613A)、一种从瓜蒌皮中分离纯化5种嘌呤及嘧啶碱基的方法(CN103304490A)、一种从瓜蒌皮中分离纯化3种黄酮苷的方法(CN 103304611 A)等通过反相制备液相色谱，也对瓜蒌皮化学成分进行了研究。然而，上述文献所用方法与瓜蒌皮注射液工业化制备工艺相去甚远，因而上述文献方法分离得到的化合物不能反映瓜蒌皮注射液的真实化学成分；另外，上述文献在反相柱层析前没有进行有效除糖和除色素操作，而瓜蒌中含有丰富的糖类和色素，会对色谱柱造成不可逆损坏，因此，该类方法不适用于工业化生产，且重复性差。

作为一种中药注射液，也有许多文献对瓜蒌皮注射液化学成分进行过报道，瓜蒌皮注射液及其制备方法(专利CN1460493A)对瓜蒌皮注射液的生产工艺进行了描述：1、水提，2、75％乙醇沉淀，3、阳离子树脂分离，收集目标段馏分，进行浓缩即得瓜蒌皮注射液原液，明确说明了所得原液中主要成分为氨基酸。瓜蒌皮或瓜蒌皮注射液的液相指纹图谱测试方法(专利CN101059482A)对瓜蒌皮注射液的指纹图谱进行了公开和说明，作者用柱前衍生法对瓜蒌皮注射液中的主要氨基酸进行了控制。现有文献对瓜蒌皮注射液的化学成分研究还局限在氨基酸类成分。

瓜蒌皮注射液应用越来越广泛，对其化学成分的分离和鉴定具有十分重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种瓜蒌皮注射液中化学成分的制备方法及其用途。本发明的方法可以从瓜蒌皮中同时制备腺苷、香叶木素-7-O-β-D-葡萄糖苷、芦丁，并且提供了以腺苷、香叶木素-7-O-β-D-葡萄糖苷、芦丁为对照品控制瓜蒌皮注射液质量的方法。本发明的方法简单易行，重复性好，环保安全。

本发明利用正相柱层析法对瓜蒌皮注射液中氨基酸进行分离时，意外发现水不溶性沉淀。对该沉淀重结晶，并进行结构鉴定，确定为香叶木素-7-O-β-D-葡萄糖苷。本发明对柱层析方法优化，并进行进一步反相色谱柱分离，最终又得到化合物腺苷和芦丁。由于本发明进行反相层析前已用正相柱除去色素和糖类，故本发明可大量制备腺苷和芦丁，为后续的质量控制提供充足的原料。

本发明是通过以下技术方案实现上述目的的：

本发明提供瓜蒌皮注射液中化学成分的制备方法，其包括下述步骤：

(1)将瓜蒌皮注射液浓缩物与硅胶混合拌样，然后进行硅胶正相柱层析，先用体积比为甲醇：二氯甲烷＝1:(3～4)作为洗脱剂进行洗脱，然后用体积比为甲醇：二氯甲烷＝1:(1～1.5)作为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得到层析物；

(2)将步骤(1)得到的层析物与甲醇混合，室温搅拌，降温至0～4℃，过滤，得滤液a，滤饼与水混匀后过滤得到滤液b，将滤液a与滤液b合并浓缩即得浓缩物；

(3)将步骤(2)所得的浓缩物采用高压制备液相色谱进行纯化，色谱条件如下：百分比为体积百分比；