[发明专利]中华按蚊烯醇化酶结合蛋白基因及其制备方法

权利要求书

1.一种中华按蚊烯醇化酶结合蛋白基因，其特征是：所述中华按蚊烯醇化酶结合蛋白基因如SEQIDNo：1所示；所述中华按蚊烯醇化酶结合蛋白基因的氨基酸序列如SEQIDNo：2所示。

2.一种中华按蚊烯醇化酶结合蛋白基因的制备方法，其特征是，包括以下步骤：

（1）采用中华按蚊成蚊mRNA反转录获得cDNA模板；

（2）以cDNA为模板，采用引物F1和F2经PCR反应体系进行扩增；所述引物F1的序列为：cagtnctnggntgncnttgntcncttcg，其中n为a、t、g或c；所述引物F2的序列为cgancngntgnttnggnntcacnggntg，其中n为a、t、g或c；

（3）扩增产物进行加尾反应，得到EBP基因部分序列，然后采用引物对F3和F4、F5和F6扩增EBP3‘和5’端序列；最后使用引物F7和F8扩增出全长EBP基因。

3.如权利要求2所述的中华按蚊烯醇化酶结合蛋白基因的制备方法，其特征是：所述PCR反应体系包括：1μlcDNA模板、1μl引物F1、1μl引物F2、2μl10×buffer、3μl25mMMgCl₂、4μl2mMdNTPs、1μlTaq聚合酶和7μl水。

4.如权利要求2所述的中华按蚊烯醇化酶结合蛋白基因的制备方法，其特征是：所述步骤（2）扩增过程为：94℃、4min；94℃、30sec；50℃、30sec；72℃、1min，共30个循环；72℃、7min；4℃、12min。

5.如权利要求2所述的中华按蚊烯醇化酶结合蛋白基因的制备方法，其特征是：所述步骤（3）加尾过程为：向步骤（2）的扩增产物中加入0.5μldATP及普通TaqDNA聚合酶，混匀后置于72℃孵育60min进行加尾反应。

6.如权利要求2所述的中华按蚊烯醇化酶结合蛋白基因的制备方法，其特征是：所述引物F3的序列为gtggaccaactccacccgactcggttcc；所述引物F4的序列为tatctggccgacacgcgcatcgactacg；所述引物F5的序列为tcgactacgtcctgccgccaaccgtgac；所述引物F6的序列为tcggggcaaaacggaaacctacaagctg；所述引物F7的序列为ggacgtcggcagtccttggttgccgttg；所述引物F8的序列为cttcgacgatcggctggttgggaatcac。