[发明专利]定量检测胶质瘤中HERC2P2表达量的方法在审
| 申请号： | 201610119988.2 | 申请日： | 2016-03-03 |
| 公开（公告）号： | CN105671162A | 公开（公告）日： | 2016-06-15 |
| 发明（设计）人： | 康春生;王琦雪;韩磊;周俊虎 | 申请（专利权）人： | 天津医科大学总医院 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 天津市宗欣专利商标代理有限公司 12103 | 代理人： | 董光仁 |
| 地址： | 300052 *** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 定量 检测 胶质 herc2p2 表达 方法 | ||
1.一种用于定量检测胶质瘤中HERC2P2表达量的探针和引物，其特征在于：上游引物的 核酸序列如SeqIDNO.1所示；下游引物的核酸序列如SeqIDNO.2所示；Taqman探针核酸 序列如SeqIDNO.3所示。
2.一种应用权利要求1所述的探针和引物定量检测胶质瘤中HERC2P2表达量的方法，其 特征在于：包括以下步骤：
a.检测样本RNA的提取；
b.将步骤a中获得RNA逆转录为cDNA；
c．以步骤b中获得的cDNA为模板，应用权利要求1所述的引物和探针，进行荧光定量 PCR，测定样本中HERC2P2表达量。
3.根据权利要求2所述的定量检测胶质瘤中HERC2P2表达量的方法，其特征在于：所述 步骤a中提取样本RNA的步骤为：取小块样本，加入Trizol溶液并研磨；按照体积比为Trizol 溶液﹕三氯甲烷=5:1的比例加入三氯甲烷，2-8℃，12000-13000rpm离心12-18min；取上层 水相加入等体积的异丙醇，2-8℃，12000-13000rpm离心10min；弃上清，先后用与Trizol溶 液等体积的75%乙醇和无水乙醇洗涤沉淀，干燥，用ddH2O溶解沉淀。
4.根据权利要求2所述的定量检测胶质瘤中HERC2P2表达量的方法，其特征在于：所述 步骤b中RNA逆转录为cDNA的步骤为：取步骤a中获得的RNA模板1ug；OligodT1ul；H2O 10ul，60-70℃保温5min，冰上冷却；再向上述混合液中加入5×反应缓冲液4ul；RNA酶抑 制剂1ul；dNTP2ul；逆转录酶1ul，40-42℃保温1h，70℃保温5-15min。
5.根据权利要求2所述的定量检测胶质瘤中HERC2P2表达量的方法，其特征在于：所述 步骤c中荧光定量PCR的扩增体系为：稀释后的步骤b中获得的cDNA模板2ul；上游引物 1ul；下游引物1ul；Taqman探针1ul；Taqmanmix10ul；H2O5ul。
6.根据权利要求2所述的定量检测胶质瘤中HERC2P2表达量的方法，其特征在于：所述 步骤c中荧光定量PCR的扩增程序为：95℃10min；95℃20s；58℃1min；40个循环。
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