[发明专利]定量检测胶质瘤中HERC2P2表达量的方法

说明书

技术领域

本发明属于核酸的测定和检测方法领域，具体是一种定量检测胶质瘤中HERC2P2 表达量的方法。

背景技术

长链非编码RNA(longnon-codingRNA,lncRNA)是近年来发现的RNA家族重 要成员，是指长度在200nt以上，并且不编码蛋白的RNA。最初，这些非编码的转录本被认为 是“暗物质”或“噪音”。近年来，随着RNA研究技术和水平的不断提高，人们发现非编码RNA在 生物体中发挥着十分重要的功能。LncRNA能够参与免疫系统的调控，X染色体的沉默，蛋白 质功能的调控等一系列生理功能。近期发现，HERC2P2也是一个lncRNA，位于15号染色体 上，是HERC2的假基因，共有6075个碱基，其与肿瘤的关系也十分密切。所以定量测定 HERC2P2的表达量对肿瘤的预防和治疗具有重要的临床意义。

Taqman探针法是高度特异性的定量PCR技术。其核心是利用Taq酶的3’-5’外切酶活性， 切断探针，产生荧光信号。由于探针与模板是特异性结合，所以荧光信号的强弱就代表了模 板的数量。

在Taqman探针法的定量PCR反应体系中，包括一对PCR引物和一条探针。探针只与 模板特异性结合，其结合位点在两条引物之前。探针的5’端标记有报告基团（Reporter，R）， 如FAM，VIC等，3’端标记有荧光淬灭基团（Quencher，Q），如TAMRA等。当探针完整的时候，报 告基团所发射的荧光能量被淬灭基团吸收，仪器检测不到信号。随着PCR的进行，Taqman酶 在链延伸过程中遇到与模板结合的探针，其3’-5’外切核酸酶活性就会将探针切断，报告 基因远离淬灭基团，其能量不能被吸收，及产生荧光信号。所以，每经过一个PCR循环，荧光 信号也和目的片段一样，有一个同步指数增长的过程，信号强度就代表了模板DNA的拷贝 数。

普通的SYBRGreenRealTimePCR，荧光染料非特异性的结合在双链DNA上，容易 受到非特异性扩增和引物二聚体的影响，而Taqman探针法能够显著提高PCR检测的灵敏性 和准确度。并且还能够利用多种荧光同时进行多重分析，这也是普通SYBR等DNA结合荧光基 团所不具备的。

发明内容

本发明就是为了填补定量检测HERC2P2表达量方法领域的空白，所提出的一种定 量检测胶质瘤中HERC2P2表达量的方法。

本发明是按照以下技术方案实现的。

一种用于定量检测胶质瘤中HERC2P2表达量的探针和引物，上游引物的核酸序列 如SeqIDNO.1所示；下游引物的核酸序列如SeqIDNO.2所示；Taqman探针核酸序列如 SeqIDNO.3所示。

一种应用上述的探针和引物定量检测胶质瘤中HERC2P2表达量的方法，包括以下 步骤：

a.检测样本RNA的提取；

b.将步骤a中获得RNA逆转录为cDNA；

c．以步骤b中获得的cDNA为模板，应用权利要求1所述的引物和探针，进行荧光定量 PCR，测定样本中HERC2P2表达量。

本发明获得了如下的有益效果。

本发明有效的填补定量检测HERC2P2表达量方法领域的空白，能够快速、精确、有 效的检测胶质瘤中HERC2P2表达量，对临床胶质瘤病人级别和生存期预测具有指导意义。

附图说明

图1是本发明Taqman探针PCR过程图；

图2是本发明HERC2P2的表达量与胶质瘤级别之间的关系图；

图3是本发明HERC2P2的表达量与病人存活率之间的关系图。

具体实施方式

1.HERC2P2基因的核苷酸序列（GeneID:400322）

tcggcccgcccctcgggccgcgagaggcgccgggatcgcgggcgccggctgagccagcgg60

ctcttgggaggctgcgtccgcgcgccggcggggcgaggcggccgggccctgcgcgtcagg120

cctgagacctgggaggaagctggagaaaagatgccctctgaatctttgtgtttggctgcc180

caggctcgcctcgactccaaatggttgaaaacagatatacagcttgcattcacaagagat240