[发明专利]一种高得率的灰树花多糖酶提方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种高得率的灰树花多糖酶提方法，属于生物工程技术领域。

背景技术

灰树花俗称栗蘑，是食、药兼用蕈菌，夏秋间常野生于栗树周围。子实体肉质，柄短呈珊瑚状分枝，重叠成丛，其外观，婀娜多姿、层叠似菊，其气味、清香四溢，沁人心脾，其肉质脆嫩爽口，百吃不厌，其营养具有很好的保健作用和很高的药用价值，尤其是所含灰树花多糖，以β-葡聚糖为主，其中抗癌活性最强，带6条支链的β-(1，3)-葡聚糖占相当大的比重，具有较强的抗癌能力。

现有技术中灰树花多糖的提取方法有碱提法、酸提法、盐提法和热水浸提法等，但在烯酸、稀碱下易使多糖发生糖苷键断裂，部分多糖水解而减少多糖提取，增加产品中的杂质含量，同时存在试剂用量大，生产周期长的问题，从而增加加工成本，降低生产效率和商业价值。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的缺陷，提供一种高得率的灰树花多糖酶提方法，采用多种酶分步酶解的方法提取灰树花多糖，以提高灰树花多糖得率，可减少糖苷键断裂，降低工艺难度和生产成本，提高生产效率。

本发明是通过如下的技术方案予以实现的：

一种高得率的灰树花多糖酶提方法，其方法如下：

（1）预处理：将灰树花清洗干净，置于50~70℃下烘干，烘干后投入粉碎机粉碎，随后过20~60目筛网制得灰树花粉末；

（2）配液：将灰树花粉末投入蒸馏水中，所述灰树花粉末的重量与蒸馏水的体积比为1:（15~20）（g/ml），控制搅拌速率为80~120r/min搅拌20~30min，制得浸提原液；

（3）一次酶解：在浸提原液中加入缓冲液，将浸提原液的PH调至4.00~4.50，随后投入反应釜中，在反应釜中加入纤维素酶，控制反应釜温度为32~38℃，搅拌速率为60~80r/min，进行一次酶解反应1~2h；

（4）一次酶灭活：将一次酶解反应结束后的溶液升高温度至60~80℃，并保持8~10min，进行一次酶灭活，随后冷却至室温制得一次浸提液；

（5）二次酶解：在一次浸提液中加入稀酸，将一次浸提液PH调至2.50~3.00，随后投入反应釜中，在反应釜中加入果胶酶，控制反应釜温度为40~55℃，搅拌速率为50~70r/min，进行二次酶解反应2~3h；

（6）二次酶灭活：将二次酶解反应结束后的溶液升高温度至100~110℃，并保持5~7min，进行二次酶灭活，随后冷却至室温制得二次浸提液；

（7）三次酶解：在二次浸提液中加入稀碱，将二次浸提液的PH调至3.50~4.00，随后投入反应釜中，在反应釜中加入菠萝蛋白酶，控制反应釜温度为50~60℃，搅拌速率为90~100r/min，进行三次酶解反应1~2h；

（8）三次酶灭活：将三次酶解反应结束后的溶液升高温度至110~120℃，并保持8~10min，进行三次酶灭活，随后冷却至室温制得三次浸提液；

（9）减压浓缩：将三次浸提液控制压力为0.1MPa，温度为60~70℃，进行减压浓缩，浓缩至200℃热测比重为1.130~1.185，得浓缩物；

（10）过滤：将浓缩物通过膜过滤，取上层固体；

（11）真空干燥：将上层固体在真空度为-0.1MP，干燥温度为30~40℃下干燥20~30min，制得灰树花多糖。

上述一种高得率的灰树花多糖酶提方法，其中，所述缓冲液由浓度为0.2mol/L的磷酸氢二钠和浓度为0.1mol/L的柠檬酸，按体积比8:11混合均匀，配制而成。

上述一种高得率的灰树花多糖酶提方法，其中，所述纤维素酶为纤维素酶xm90a，所述纤维素酶xm90a购自于湖州礼来生物技术有限公司，所述纤维素酶的添加质量占浸提原液质量的1~2%。

上述一种高得率的灰树花多糖酶提方法，其中，所述稀酸为稀盐酸或稀柠檬酸中的一种。

上述一种高得率的灰树花多糖酶提方法，其中，所述果胶酶为果胶酶Y23，所述果胶酶Y23购自于上海如吉生物科技发展有限公司，所述果胶酶的添加质量占一次浸提液的1~2%。

上述一种高得率的灰树花多糖酶提方法，其中，所述稀碱为稀氢氧化钠或稀碳酸氢钠中的一种。

上述一种高得率的灰树花多糖酶提方法，其中，所述菠萝蛋白酶为食品级菠萝蛋白酶，所述食品级菠萝蛋白酶购自于南宁庞博生物工程有限公司，所述菠萝蛋白酶的添加质量占二次浸提液的0.5~1.5%。

本发明的有益效果为：