[发明专利]一种胶质瘤肿瘤疫苗鼠体效力检测方法

权利要求书

1.一种胶质瘤肿瘤疫苗鼠体效力检测方法，其特征在于，包括以 下步骤：

(1)、建立模型：在小鼠颅内原位注射带荧光素酶的胶质瘤细胞系 GL261-Luc2，24小时后,将荧光素酶底物注射到小鼠腹腔，通过活体 成像系统观察，建立颅内荷瘤小鼠模型；

(2)、免疫过程：肿瘤注射后第3天开始，间隔5-10日给予小鼠模 型胶质瘤肿瘤疫苗免疫2-4次。

(3)、疫苗免疫后每周通过活体成像系统观察记录肿瘤细胞增殖的 情况，同时记录小鼠死亡时间，绘制生存曲线，计算5周存活率；

(4)、距末次胶质瘤肿瘤疫苗免疫小鼠3-14天后处死小鼠，统计小 鼠脾细胞数目变化；

(5)、距末次胶质瘤肿瘤疫苗免疫小鼠3-14天后处死小鼠，对小鼠 颅内肿瘤组织微环境中CD8⁺T细胞(杀伤性T细胞)，Treg细胞(调节性 T细胞)和MDSC(骨髓来源的抑制性细胞)进行抗体标记，采用流式细 胞术检测细胞群比例；

(6)、根据以下5个指标判定胶质瘤肿瘤疫苗效力：疫苗免疫后小 鼠颅内肿瘤生长缓慢或完全消失；5周存活率20％以上；脾细胞数量增 加；肿瘤组织微环境中CD8⁺T细胞比例增加；Treg和MDSC比例二者 或其中一种细胞比例降低。

2.如权利要求1所述的胶质瘤肿瘤疫苗鼠体效力检测方法，其特 征在于，当5个指标中任何2项项检验结果无变化，判定该疫苗未能 对胶质瘤有明确的治疗效果。

3.如权利要求1所述的胶质瘤肿瘤疫苗鼠体效力检测方法，其特 征在于，所述疫苗注射位置为小鼠双侧肩甲部皮下注射。

4.如权利要求1所述的胶质瘤肿瘤疫苗鼠体效力检测方法，其特 征在于，所述疫苗的注射体积为50-300μl/只，左右两侧等量注射。

5.如权利要求1所述的胶质瘤肿瘤疫苗鼠体效力检测方法，其特 征在于，所述携带荧光素酶的胶质瘤细胞系GL261-Luc2的注射量为 1-2×10⁴个/只，注射体积为1-3μl。

6.如权利要求1所述的胶质瘤肿瘤疫苗鼠体效力检测方法，所述 颅内原位注射位置为前囟后0.5mm，右2mm处钻孔，下针3mm。

7.如权利要求1所述的胶质瘤肿瘤疫苗鼠体效力检测方法，所述 肿瘤疫苗的免疫注射时间为肿瘤细胞注射后第3天、10天和17天。

8.如权利要求1所述的胶质瘤肿瘤疫苗鼠体效力检测方法，所述 通过小动物活体成像系统观察记录肿瘤细胞增殖情况的时间为肿瘤细 胞注射后24h、7天、14天、21天、28天和35天。