[发明专利]一种胶质瘤肿瘤疫苗鼠体效力检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术检验领域，具体涉及一种胶质瘤肿瘤疫苗鼠体效力检测方法。

背景技术

神经胶质瘤是最常见的颅内原发性肿瘤，肿瘤组织与正常脑组织之间没有明显界限，外科手术及放化疗效果均不佳，术后极易复发，患者生存率低，严重威胁人类健康。针对胶质瘤的不良预后，肿瘤免疫治疗能有效打破机体对肿瘤的耐受，产生抗肿瘤免疫反应，因此极有可能成为扭转神经胶质瘤复发的有效方法。针对神经胶质瘤的肿瘤免疫治疗已经报道的肿瘤疫苗主要包括，肿瘤细胞疫苗、基因疫苗、肽疫苗、肿瘤裂解物疫苗、树突状细胞疫苗等等。肿瘤疫苗的主要作用机制主要为给机体提供肿瘤相关抗原，通过抗原提呈细胞将抗原提呈给效应细胞进而激发特异性免疫功能来攻击肿瘤细胞，克服肿瘤的免疫逃逸状态。近年研究实验证实，针对某些肿瘤类型，肿瘤疫苗可不同程度的延长肿瘤患者的生存期，具有很好的抗肿瘤效果。因此，近年来肿瘤疫苗的研发工作受到极大重视，相应临床前肿瘤疫苗效力检测方法的研究也不断推进。用于肿瘤疫苗体内效力检验的动物模型是评价疫苗作用和安全性的重要方法。在肿瘤疫苗的研发和转化过程中，由于肿瘤疫苗治疗肿瘤病灶部位、靶标和生物学特征的不同，因此不同肿瘤类型的肿瘤疫苗有必要通过配套的动物体内效力检验方法用以检验该疫苗的安全性和抗肿瘤效力。

现有已经用于评价胶质瘤肿瘤疫苗体内效力的小鼠肿瘤模型多采用皮下接种肿瘤细胞，很难模拟胶质瘤所在颅内的生长环境；有的小鼠模型采用颅内原位接种肿瘤细胞，则通过小动物核磁共振仪观察记录颅内肿瘤细胞生长情况，由于该方法荷瘤用肿瘤细胞需要特殊标记，检测仪器使用过程需要特殊防护，因此，这种检测方法并不适于中小规模实验室和医疗研究机构的应用；此外，现有检测方法的检测指标多限于小鼠的生存期和效应性T细胞的侵润情况，忽视免疫抑制性细胞的检测，并不能全面的分析肿瘤疫苗发挥抗肿瘤功能的机制。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种检验胶质瘤肿瘤疫苗体内抗肿瘤效力的方法，它可以更加全面、高效、节省成本的评价肿瘤疫苗的治疗效果。

一种胶质瘤肿瘤疫苗鼠体效力检测方法，包括以下步骤：

(1)、建立模型：在小鼠颅内原位注射带荧光素酶的胶质瘤细胞系GL261-Luc2，24小时后,将荧光素酶底物注射到小鼠腹腔，通过活体成像系统观察，建立颅内荷瘤小鼠模型；

(2)、免疫过程：肿瘤注射后第3天开始，间隔5-10日给予小鼠模型胶质瘤肿瘤疫苗免疫注射2-4次。

(3)、疫苗免疫后每周通过活体成像系统观察记录肿瘤细胞增殖的情况，同时记录小鼠死亡时间，绘制生存曲线，计算5周存活率；

(4)、距末次胶质瘤肿瘤疫苗免疫小鼠3-14天后处死小鼠，统计小鼠脾细胞数目变化；

(5)、距末次胶质瘤肿瘤疫苗免疫小鼠3-14天后处死小鼠，对小鼠颅内肿瘤组织微环境中CD8⁺T细胞(杀伤性T细胞)，Treg细胞(调节性T细胞)和MDSC(骨髓来源的抑制性细胞)进行抗体标记，采用流式细胞术检测细胞群比例；

(6)、根据以下5个指标判定胶质瘤肿瘤疫苗效力：疫苗免疫后小鼠颅内肿瘤生长缓慢或完全消失；5周存活率20％以上；脾细胞数量增加；肿瘤组织微环境中CD8⁺T细胞比例增加；Treg和MDSC比例二者或其中一种细胞比例降低。

优选的，当5个指标中任何2项项检验结果无变化，判定该疫苗未能对胶质瘤的明确的治疗效果。

优选的，疫苗的注射位置为小鼠双侧肩甲部皮下注射。

优选的，所述疫苗的注射体积为50-300μl/只，左右两侧等量注射。

优选的，所述所述携带荧光素酶的胶质瘤细胞系GL261-Luc2的注射量为1-2×10⁴个/只，注射体积为1-3μl。

优选的，所述肿瘤疫苗在肿瘤细胞注射后第3天、10天和17天进行3次免疫注射。

优选的，所述通过小动物活体成像系统观察记录肿瘤细胞增殖情况的时间为肿瘤细胞注射后24h、7天、14天、21天、28天和35天。