[发明专利]一种在高山被孢霉中表达异源ω-3脱饱和酶的重组菌株及其构建方法在审
| 申请号： | 201610128935.7 | 申请日： | 2016-03-07 |
| 公开（公告）号： | CN105567579A | 公开（公告）日： | 2016-05-11 |
| 发明（设计）人： | 陈海琴;陈永泉;陈卫;梅甜甜;顾震南;张灏 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/15 | 分类号： | C12N1/15;C12N15/80;C12P7/64;C12R1/645 |
| 代理公司： | 北京君智知识产权代理事务所(普通合伙) 11305 | 代理人： | 吕世静 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 高山 被孢霉中 表达 饱和 重组 菌株 及其 构建 方法 | ||
1.一株过表达ω-3脱饱和酶oPaFADS17基因的重组高山被孢霉(Mortierella alpina)MA-oPaFADS17-3，该菌株于2015年10月12日保藏于中国微生物菌种 保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国 科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCCNo.11394。
2.根据权利要求1所述的重组高山被孢霉，其特征在于所述ω-3脱饱和酶 oPaFADS17基因是经过优化的来源于瓜果腐霉的ω-3脱饱和酶基因，其核酸序列 如SEQNO.1所示。
3.根据权利要求1所述的重组高山被孢霉，其特征在于所述菌株是以含ω-3 脱饱和酶oPaFADS17基因的根瘤土壤杆菌转化高山被孢霉尿嘧啶营养缺陷型菌 株构建而成的。
4.根据权利要求3所述的重组高山被孢霉，其特征在于所述菌株是用含有 ω-3脱饱和酶oPaFADS17基因的重组质粒pBIG2-ura5s-oPaFADS17转化根瘤土 壤杆菌后，再以含转化质粒pBIG2-ura5s-oPaFADS17的根瘤土壤杆菌转化高山被 孢霉尿嘧啶营养缺陷型菌株构建而成的。
5.构建权利要求1-4中任一项权利要求所述的重组高山被孢霉的方法，包 括以下步骤：
a)根据高山被孢霉密码子偏好性，优化已知的ω-3脱饱和酶PaD17序 列，命名为oPaFADS17；
b)人工合成优化后的ω-3脱饱和酶oPaFADS17基因，如SEQNO.1所 示；
c)构建重组质粒pBIG2-ura5s-oPaFADS17；
d)用构建获得的重组质粒pBIG2-ura5s-oPaFADS17转化根瘤土壤杆菌；
e)用含重组质粒pBIG2-ura5s-oPaFADS17的根瘤土壤杆菌转化高山被 孢霉尿嘧啶营养缺陷型菌株；
f)筛选鉴定转化菌株，获得过表达ω-3脱饱和酶oPaFADS17基因的重 组高山被孢霉菌株。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述步骤d)的根瘤土壤杆菌 为根瘤土壤杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)C58C1。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述步骤e)的高山被孢霉尿 嘧啶营养缺陷型菌株是高山被孢霉MAU1，该菌株于2013年11月01日保藏于 中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，该菌株保藏于中国微生物菌种 保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.8414。
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