[发明专利]一种固态发酵联合液态酶解的制备水产蛋白活性肽的方法

权利要求书

1.本发明公开了一种固态发酵联合液态酶解的制备水产蛋白活性肽的方法，其特征在 于：该方法包括如下步骤：

（1）将斜面保藏的能产耐高温蛋白酶的地衣芽孢杆菌（Bacilluslicheniformis）HL-3 接入到灭菌后冷却的LB液体培养基中，于55℃、150r/min培养12h，制备成地衣芽孢杆菌 （Bacilluslicheniformis）HL-3种子液备用；

（2）将新鲜的水产蛋白绞碎后备用，将植物蛋白粉碎后过60目筛备用；

（3）将步骤（2）制得的绞碎水产蛋白和粉碎后的植物蛋白按质量比为0.5~1.5：1的比例 混合，并加营养物和水混匀，获得最终水分含量控制在40%～80%范围内的发酵培养基；

（4）往步骤然（3）制得的发酵培养基上接入步骤（1）所制备的地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）HL-3种子液，并混匀；

（5）固态发酵：将步骤（4）获得的加入菌的发酵培养基按照下列方法进行发酵：发酵培 养基分装在已消毒的发酵浅盘中，装料厚度为4cm～8cm，浅盘中发酵培养基表面覆盖已灭 菌的湿纱布，再将浅盘置于已灭菌的固体发酵房内的搁架上发酵，控制环境温度在55℃~60 ℃，发酵时间为38h～48h；

（6）液态酶解：将步骤（5）得到固态发酵产物与水按质量比为1：3的比例混合，并搅拌均 匀后加入到酶解罐中，控制酶解温度为55℃，酶解2h；

（7）成品的加工：将步骤（6）得到的液态酶解产物通过过滤去除沉淀得到酶解液；酶解 液通过截留分子量为5000道尔顿的超滤膜的超滤去除大分子蛋白质而得到透过液；透过液 然后通过截留分子量为200道尔顿的纳滤膜的纳滤去除氨基酸而得到浓缩液；浓缩液经过 冷冻干燥而得到活性肽成品。

2.根据权利要求1所述的一种固态发酵联合液态酶解的制备水产蛋白活性肽的方法， 其特征在于：所述步骤（1）中所用的地衣芽孢杆菌（Bacilluslicheniformis）HL-3在广东 省微生物菌种保藏中心的保藏编号为GDMCCNo：60003。

3.根据权利要求1所述的一种固态发酵联合液态酶解的制备水产蛋白活性肽的方法， 其特征在于：所述步骤（2）中的水产蛋白为罗非鱼下脚料、南极磷虾、虾头、扇贝裙边、鳕鱼 下脚料、鱿鱼下脚料、牡蛎、青鳞鱼下脚料、青鱼下脚料、鲢鱼下脚料、草鱼下脚料和鲣鱼下 脚料中的一种。

4.根据权利要求1所述的一种固态发酵联合液态酶解的制备水产蛋白活性肽的方法， 其特征在于：所述步骤（2）中的植物蛋白为豆粕、花生粕、棉籽粕和菜粕中的一种或其中两 种以上的混合物。

5.根据权利要求1所述的一种固态发酵联合液态酶解的制备水产蛋白活性肽的方法， 其特征在于：所述步骤（3）中的营养物为玉米粉、食品级氯化钙、食品级氯化亚铁和食品级 磷酸氢二钾组成的混合物。

6.根据权利要求1所述的一种固态发酵联合液态酶解的制备水产蛋白活性肽的方法， 其特征在于：所述步骤（3）中的营养物的加入量以添加的营养物的质量占发酵培养基总质 量百分比计，分别为：玉米粉0.01%～5%，食品级氯化钙0.01%～5%，食品级氯化亚铁0.01%～ 5%，食品级磷酸氢二钾0.01%～5%。

7.根据权利要求1所述的一种固态发酵联合液态酶解的制备水产蛋白活性肽的方法， 其特征在于：所述步骤（4）中地衣芽孢杆菌（Bacilluslicheniformis）HL-3种子液的接种 量以接入种子液的质量占发酵培养基总质量百分比计，为1%～15%。