[发明专利]一种固态发酵联合液态酶解的制备水产蛋白活性肽的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种固态发酵联合液态酶解的制备水产蛋白活性肽的方法，属于水产 品加工与利用领域。

背景技术

蛋白质酶解的后的产物小肽不但容易消化、吸收，而且还具有抗高血压、抗胆固 醇、抗血栓形成、改善脂质代谢、增强人体体能、帮助恢复疲劳、促进钙磷和其它微量元素的 吸收、促进大脑发育、提高记忆力、增强巨噬细胞和B细胞活力、增强免疫功能、保护表皮细 胞、防止黑色素沉淀、消除体内自由基等功效。

关于水产蛋白活性肽的制备，国内进行了大量的研究。目前，水产蛋白活性肽的制 备方法主要有自溶酶解、酶解法、液态发酵法和固态发酵与液态酶解相结合的方法这四种。 专利申请200810195646.4“内源酶制备生物活性小肽的工艺”公开了一种利用海洋低值鱼 体内的内源酶自溶酶解的方法制备水产蛋白生物活性小肽的方法。专利申请 201410145196.3“一种制备扇贝裙边活性肽的方法”公开了一种酶解法制备水产蛋白活性 肽的方法。专利申请CN102028091A“一种纳豆菌发酵法制备低分子鱼肽的方法”公开了一种 液体发酵法制备鱼蛋白肽的方法，专利申请201210539941.3“一种由鱼蛋白肽和与大豆肽 组成的蛋白肽的生产方法”公开了一种由固态发酵与液态酶解相结合制备水产蛋白活性肽 的方法。

现有的水产蛋白活性肽制备技术中存在以下缺陷。首先，现有的水产蛋白活性肽 制备技术中都有高温处理的过程。以上制备技术中都有高温灭酶这一工序；微生物发酵的 方法原料需要灭菌。以上这些高温处理，会在一定程度减弱制备的功能肽或水产蛋白本身 所含其它功能性成分中的生物学活性；另外高温处理过程，会增强美拉德，使得酶解液颜色 变深，为成品加工过程增加了负担。其次，外加酶酶解的方法需要外加蛋白酶，增加了成本； 自溶酶解由于内源酶的不足，导致酶解不彻底。另外，微生物发酵法虽然不用外加蛋白酶， 但是原料需要灭菌导致内源酶失活，不能充分地有效利用内源酶。

发明内容

针对现有的水产蛋白活性肽制备技术存在的问题。本发明的主要目的是提供一种 低温的制备水产蛋白活性肽的方法，以便更好地保留制备的功能肽和水产蛋白本身所含功 能性成分的生物学活性。本发明的另一目的是提供一种发酵法制备活性肽的方法，使得微 生物发酵与内源酶酶解过程能有机结合在一起。本发明还有一目的是简化活性肽的制备工 序，降低其生产成本。

为了解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：一种固态发酵联合液态酶解 的制备水产蛋白活性肽的方法，包括如下步骤：

（1）将斜面保藏的能产耐高温蛋白酶的地衣芽孢杆菌（Bacilluslicheniformis）HL- 3接入到灭菌后冷却的LB液体培养基中，于55℃、150r/min培养12h，制备成地衣芽孢杆菌 （Bacilluslicheniformis）HL-3种子液备用；

（2）将新鲜的水产蛋白绞碎后备用，将植物蛋白粉碎后过60目筛备用；

（3）将步骤（2）制得的绞碎水产蛋白和粉碎后的植物蛋白按质量比为0.5~1.5：1的比例 混合，并加营养物和水混匀，获得最终水分含量控制在40%～80%范围内的发酵培养基；

（4）往步骤然（3）制得的发酵培养基上接入步骤（1）所制备的地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）HL-3种子液，并混匀；

（5）固态发酵：将步骤（4）获得的加入菌的发酵培养基按照下列方法进行发酵：发酵培 养基分装在已消毒的发酵浅盘中，装料厚度为4cm～8cm，浅盘中发酵培养基表面覆盖已灭 菌的湿纱布，再将浅盘置于已灭菌的固体发酵房内的搁架上发酵，控制环境温度在55℃~60 ℃，发酵时间为38h～48h；

（6）液态酶解：将步骤（5）得到固态发酵产物与水按质量比为1：3的比例混合，并搅拌均 匀后加入到酶解罐中，控制酶解温度为55℃，酶解2h；

（7）成品的加工：将步骤（6）得到的液态酶解产物通过过滤去除沉淀得到酶解液；酶解 液通过截留分子量为5000道尔顿的超滤膜的超滤去除大分子蛋白质而得到透过液；透过液 然后通过截留分子量为200道尔顿的纳滤膜的纳滤去除氨基酸而得到浓缩液；浓缩液经过 冷冻干燥而得到活性肽成品。