[发明专利]一种快速检测副鸡禽杆菌的试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测副鸡禽杆菌的LAMP引物组，包括：外引物F3 和B3，内引物FIP和BIP，其特征在于：所述的外引物F3和B3的 核苷酸序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示，所述的内引物FIP 和BIP的核苷酸序列如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示。

2.权利要求1所述的引物组在制备检测副鸡禽杆菌的LAMP试剂 盒或检测试剂中的应用。

3.一种含有权利要求1所述引物组的LAMP试剂盒。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：还包括：LAMP缓 冲液、BstDNA聚合酶、dNTPs、无菌去离子水、阳性对照和阴性对 照。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述LAMP引物组 的浓度为：外引物F3和B3的浓度为5pmol/μL；内引物FIP和BIP的浓 度为40pmol/μL。

6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：包括：

1)10×LAMP缓冲液；2)8000U/mLBstDNA聚合酶；3)10mM dNTPs；4)LAMP引物组；5)无菌去离子水；6)荧光染料：10×SYBR GreenI；7)阳性对照：0083、022和Modesto副鸡禽杆菌基因组DNA ；阴性对照：无菌去离子水。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于：所述的10×LAMP 缓冲液含有25℃下pH8.8的200mMTris-HCl、100mM氯化钾、100mM 硫酸铵、20mM硫酸镁、8M甜菜碱和体积百分浓度为1％的曲拉通 X-100。

8.采用权利要求4-7任一项所述的试剂盒快速检测副鸡禽杆菌的 方法。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：试剂盒快速检测 的反应体系为：每25μL反应液中，引物组的引物用量为各1μL， BstDNA聚合酶1μL，10mmol/L的dNTPs3.5μL，待检样品DNA2～ 3μL，无菌去离子水适量；反应条件为：65℃恒温反应60min，并在80℃ 持续10min。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：试剂盒采用荧光 目视法时，反应体系中还包括10×SYBRGreenI2.5μL，反应体系总 量保持25.0μL不变。