[发明专利]一种磁性固定化磷脂酶C和磁性固定化磷脂酶A2联合应用对大豆毛油进行脱胶的方法

权利要求书

1.一种磁性固定化磷脂酶C和磁性固定化磷脂酶A₂联合应用对大豆毛油进行脱胶的方法，通过以下步骤实现：

步骤一：PLC和PLA₂的磁性固定化：首先将lg的Fe₃O₄/SiOx-g-P(GMA)复合粒子置于在50mL的磷酸缓冲液(0.1M，pH7.0)中浸泡24h，磁分离后将上述浸泡后的载体加入到一定量的含0.2％的磷脂酶的磷酸缓冲液(0.1M，pH6.5)中，同时在45℃下搅拌反应一段时间，最后磁分离并用磷酸缓冲液(0.1M，pH7.0)洗涤得到固定化PLC，将所得的固定化酶放置在冰箱内4℃下保存；将lg的Fe₃O₄/SiOx-g-P(GMA)纳米复合粒子置于在50mL的磷酸缓冲液(0.1M，pH7.0)中浸泡24h，磁分离后将上述浸泡后的载体加入到一定量的含0.2％的磷脂酶的磷酸缓冲液(0.1M，pH7.0)中，同时在45℃下搅拌反应一段时间，最后磁分离并用磷酸缓冲液(0.1M，pH7.0)洗涤得到固定化PLA₂，将所得的固定化酶放置在冰箱内4℃下保存；

步骤二：磁性固定化PLC和磁性固定化PLA₂连用脱胶：准确称取300g大豆毛油，水浴加热到85℃，加入一定量的质量分数为45％(w/w)柠檬酸缓冲溶剂，在该温度下200r/min搅拌维持20min，充分搅拌混匀，然后进行冷却，将处理后的油和2.5％的蒸馏水加入500mL反应器中，调节至一定温度，再将油样中加入缓冲溶液调到pH为6.0～8.0，添加一定量的磁性固定化PLC，PLC在磁性固定化酶添加量0.4～1.2g/kg，在200r/min的搅拌速度下进行酶解反应，调节反应温度至45～65℃，酶解反应1.5～3.5h。反应结束后，用磁铁将磁性固定化PLC分离出来；然后加入一定量的磁性固定化PLA₂，PLA₂在磁性固定化酶添加量0.06～0.14g/kg，在200r/min的搅拌速度下进行酶解反应，调节pH为6.0～8.0反应温度至45～65℃，酶解反应1.5～3.5h，反应结束后，用磁铁将磁性固定化PLA₂分离出来；

步骤三：测定脱胶油中的磷含量。

2.根据权利要求1所述的用磁性固定化磷脂酶C和磁性固定化磷脂酶A₂联合应用对大豆毛油脱胶的方法，其特征在于步骤二中磁性固定化酶脱胶条件进行进一步确定，PLC反应体系的pH值为6.5～7.5，磁性固定化PLC添加量0.6～1.0g/kg，反应温度为50～60℃，反应时间2.0～3.0h。

3.根据权利要求1所述的用磁性固定化磷脂酶C和磁性固定化磷脂酶A₂联合应用对大豆毛油脱胶的方法，其特征在于步骤二中磁性固定化酶脱胶条件进行进一步确定，磷磁性固定化PLA₂添加量0.08～0.12g/kg，PLA₂反应体系的pH值为6.5～7.5，反应温度为50～60℃，反应时间2.0～3.0h。