[发明专利]鉴别基因I型与II型鸭呼肠孤病毒的引物及方法

说明书

本发明公开了一种鉴别基因I型与II型鸭呼肠孤病毒的引物及方法。所述引物包括引物对1和引物对2，引物对1为：上游引物：5’‑CTGACGCTTTTGAAGTCCACT‑3’，下游引物：5’‑AACACTGTATCCTGGACCAGC‑3’，引物对2为：上游引物：5’‑CGTCTATTCTCGTTTCCCTTC‑3’，下游引物：5’‑GAGAGAGAGGATAGCTCGGAC‑3’。采用本发明引物及方法不仅能够同时检测基因I型与II型鸭呼肠孤病毒，而且还具有重复性好、特异性强、敏感性高的特点。

技术领域

本发明涉及水禽病毒检测技术领域，特别是涉及鉴别基因I型与II型鸭呼肠孤病毒的引物及方法。

背景技术

鸭呼肠病毒病是由鸭呼肠病毒(duck reovirus，DRV)引起的番鸭、鸭、半番鸭和鹅等水禽的一种急性传染病。1997以来在我国南方广东、广西、福建、浙江和江西等广泛流行，主要感染番鸭，引起鸭坏死性肝炎(也称为番鸭“白点病”或者“花肝病”)。2000年以后，在我国的江苏、浙江、福建、广东、河北、山东等省鸭群中流行一种新肝病(亦称“出血性坏死性肝炎”或“脾出血坏死症”)。该病原除能感染番鸭、半番鸭和鹅外，还能感染肉鸭(北京鸭和樱桃谷鸭)和野鸭等多种水禽，经分离鉴定该病原为一种新型鸭呼肠孤病毒(noval duckreovirus，N-DRV)。N-DRV感染不仅引起雏鸭和雏鹅发病和死亡，还可以引起免疫抑制和生长发育障碍。据调查，雏鸭群发病率和死亡率差异较大，发病率为5％-40％，病死率10％-50％，而发病鸭耐过后也成为僵鸭。该疫病的流行给番鸭、肉鸭等水禽养殖业造成了严重的危害和经济损失。

近年来，国内学者将两种流行的鸭呼肠孤病毒分别定义为经典性鸭呼肠孤病毒(classical duck reovirus，C-DRV)，即番鸭呼肠孤病毒(Muscovey duck reovirus，MDRV)和鸭新型呼肠孤病毒(new-type duck reovirus，N-DRV)。随着C-DRV和N-DRV全基因组序列的破译，通过进化树分析可知：这两种病毒同属于呼肠孤病毒科(Reoviridae)，正呼肠孤病毒属(Orthoreovirus genus)，禽正呼肠孤病毒群(Avian Orthoreovirus species groupII)成员，并揭示二者属于不同的基因型：基因I型(C-DRV)和II型(N-DRV)。

随着我国鸭养殖规模的不断扩大，DRV的流行和发病特点都在不断的变化，临床表现上趋于复杂化，尤其N-DRV引起的临床病理变化。最初，N-DRV病的主要特征为肝脏不同程度点斑/块状出血和坏死及脾脏肿大坏死等，单从临床剖检及病理变化就可区分N-DRV与C-DRV病。但近些年来，临床上出现了一些类似C-DRV病临床病理变化的N-DRV病例，即肝脏表面白色点坏死灶，且无明显特征出血斑，使得从临床上无法区分诊断，此外，DRV也易于与其他病原混合感染，这些问题给兽医临床诊断带来了很大困难。因此，亟需建立一种速度快，敏感性、特异性与重复性好的鉴别诊断基因I型与II型两种基因型鸭呼肠孤病毒的检测方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种鉴别基因I型与II型鸭呼肠孤病毒的引物及方法，以解决临床上不易区分诊断基因I型与II型鸭呼肠孤病毒的问题。

一种用于鉴别基因I型与II型鸭呼肠孤病毒的引物，包括引物对1和引物对2，

引物对1为：

上游引物：5’-CTGACGCTTTTGAAGTCCACT-3’，

下游引物：5’-AACACTGTATCCTGGACCAGC-3’，

引物对2为：

上游引物：5’-CGTCTATTCTCGTTTCCCTTC-3’，

下游引物：5’-GAGAGAGAGGATAGCTCGGAC-3’。