[发明专利]伊马替尼基因杂质的高灵敏度分析方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种伊马替尼的基因杂质分析方法，特别是用高效液相色谱—质谱联 用法对伊马替尼的基因杂质进行分离和定量测定的方法。

背景技术

甲磺酸伊马替尼是由由诺华公司研发，是全球第一个上市的肿瘤发生相关信号传 导抑制剂，临床用于治疗费城染色体阳性的慢性髓性白血病(Ph+CML)的慢性期、加速期或 急变期，治疗不能切除和/或发生转移的恶性胃肠道间质瘤(GIST)的成人患者。甲磺酸伊马 替尼的化学名称为4-(4-甲基-1-哌嗪)甲基-N-4-甲基-3-4-(3-吡啶)-2-嘧啶氨基苯基-苯 甲酰胺甲磺酸盐。

基因毒性杂质是在以DNA反应物质为主要研究对象的体内/体外试验中，发现它们 对DNA有潜在的破坏性。按照目前的法规来说，(体内)基因毒性物质在任何摄入量水平上对 DNA都有潜在的破坏性，这种破坏可能导致肿瘤的产生，必须严格控制。

化合物N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺是合成甲磺酸伊马替尼 时的中间体，属于潜在的基因毒性杂质。在欧洲药典(EP8.4)甲磺酸伊马替尼原料药质量标 中，将化合物N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺命名为杂质F，并规定其限 度为不得大于20ppm，并公开了用高效液相色谱—质谱联用的检测杂质F的方法。按照欧洲 药典(EP8.4)的公开的试验条件，配制不同浓度的杂质F的对照品，检测限以S/N≥3计，定量 限以S/N≥10计，确定该方法杂质F的检测限为0.1ppm、定量限为0.25ppm。

为了更严格的控制杂质F的含量，需寻求一种简单、快捷、专属性强、灵敏度高的高 效液相色谱——质谱联用方法显得尤为重要。

发明内容

本发明的目的是提供一种伊马替尼杂质F更好的一种高效液相色谱—质谱联用的 分析方法，使主成分和杂质F达到简便、有效分析的目的，并同时提高了杂质F的定量分析 的灵敏度。

甲磺酸伊马替尼与杂质F见下表：

发明人通过对高效液相色谱——质谱联用方法中对色谱柱、流动相、质谱等条件 反复筛选，探索出了合适的分析条件。为兼顾主成分与杂质的分离要求，选择了合适的缓冲 溶液体系、流动相的比例及质谱等关键检测条件，最终确立的方法达到了上述发明目的。

本发明的技术方案如下：

甲磺酸伊马替尼杂质F的分析方法，采用高效液相色谱—质谱联用法，以0.01％～ 0.05％甲酸乙腈溶液和甲酸铵缓冲液为流动相，在十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱上进行梯 度洗脱。

溶解样品所用的稀释液，乙腈与水的比例是20：80；

所述甲酸铵缓冲盐的pH为3～4，优选pH为3.4～3.5；

甲酸铵的浓度为0.6g/L～1.2g/L。

色谱检测条件为：流动相洗脱速率0.8～1.2ml/min；色谱柱温度30℃～40℃；

样品进样量：10μl。

质谱条件为：

上述方法中梯度洗脱的梯度优选为：

本方法的效果和优点是：

1、可有效分离出甲磺酸伊马替尼与杂质F，空白稀释液不干扰杂质F的检测，方法 专属性强，快速；

2、能对甲磺酸伊马替尼杂质F进行定量，且有很高的灵敏度，检测限为0.02ppm、定 量限为0.05ppm；

3、操作简单

本发明的有益效果是专属性强、简单快捷、灵敏度高，可用于甲磺酸伊马替尼及含 有甲磺酸伊马替尼的药物中潜在基因毒性杂质的质量控制。

附图说明

图1是甲磺酸伊马替尼杂质F线性图。

具体实施方式

实施例一甲磺酸伊马替尼和杂质F的高效液相色谱—质谱串联法分析

杂质F。

仪器：UliMate3000高效液相色谱仪(美国戴安公司)；TSQQuantumUltra三重四 极杆串联质谱仪(美国ThermoScientific公司)