[发明专利]一种用于转育优良油菜温敏不育系的分子标记辅助选择方法有效
| 申请号： | 201610144773.6 | 申请日： | 2016-03-14 |
| 公开（公告）号： | CN105648091B | 公开（公告）日： | 2020-06-16 |
| 发明（设计）人： | 林良斌;唐天向;周筱妍;张传利;唐伟杰;刘雅婷 | 申请（专利权）人： | 云南农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895 |
| 代理公司： | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 汤东凤 |
| 地址： | 650201 云南省昆明*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 优良 油菜 不育 分子 标记 辅助 选择 方法 | ||
1.一种用于转育优良油菜温敏不育系的分子标记辅助选择方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤①：采用CTAB法提取用于优良油菜温敏不育系选育的杂交后代单株的基因组DNA，并检测DNA样品的质量；
步骤②：用连锁的SSR标记的正反向引物PCR扩增所述步骤①中提取的基因组DNA，并用4％～8％的聚丙烯酰胺凝胶电泳检测扩增产物；
步骤③：依据所述步骤②中的电泳检测结果，将具有目标带的植株作为优良油菜温敏不育系进一步选育的育种材料；
所述步骤②中连锁标记与目标基因的连锁距离为0.8～1cm；
所述步骤②中PCR扩增时连锁SSR标记的正反向引物序列分别是5’-CTCTCCTGATCCTCTCCTTC-3’和5’-CTTGTAGAGAACCCGAAC TG-3’；
所述步骤③中将目标带大小为550bp的植株作为优良油菜温敏不育系进一步选育的育种材料。
2.如权利要求1所述的一种用于转育优良油菜温敏不育系的分子标记辅助选择方法，其特征在于，所述步骤②中PCR扩增反应体系为：10×PCR缓冲液1.0～3.0μl，浓度为25mmol/L的MgCl2溶液2.0～3.0μl，浓度为2.5mmol/L的脱氧核苷酸溶液0.3～0.7μl，浓度为5U/μl的Taq酶0.7～0.9μl，浓度为10mmol/L的正反向引物各0.3～0.7μl，2～6μl的DNA，加ddH2O至10.0～30.0μl。
3.如权利要求1所述的一种用于转育优良油菜温敏不育系的分子标记辅助选择方法，其特征在于，所述步骤②中的PCR扩增程序为：94℃预变性5min；94℃变性1min，55℃退火1min，72℃延伸1.5min，35个循环；72℃终延伸10min，4℃保存。
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