[发明专利]针对蜂蜜中MRJP1抗体对的制备方法、检测方法及试剂盒

权利要求书

1.一种针对蜂蜜中内源MRJP1抗体对的制备方法，其特征在于，所述的MRJP1的特异性 多肽M4的氨基酸序列为IKEALPHVPIFD，如SEQIDNO：1所示；所述的MRJP1的特异性多肽M5 的氨基酸序列为SGEYDYKNNYPSDID，如SEQIDNO：2所示；然后免疫新西兰白兔。

2.一种针对蜂蜜中内源MRJP1的免疫检测方法，其特征在于，

1）利用MRJP1特异性多克隆抗体SP-1为捕获抗体，MRJP1特异性多克隆抗体SP-2为检测 抗体，以免疫双抗夹心法测定待测蜂蜜中MRJP1含量；

所述的MRJP1特异性多克隆抗体SP-1通过利用MRJP1特异性多肽M4免疫新西兰白兔得 到；所述的MRJP1特异性多肽M4的氨基酸序列为IKEALPHVPIFD，如SEQIDNO：1所示；

所述的MRJP1特异性多克隆抗体SP-2通过利用MRJP1特异性多肽M5免疫新西兰白兔得 到，所述的MRJP1特异性多肽M5的氨基酸序列为SGEYDYKNNYPSDID，如SEQIDNO：2所示。

3.根据权利要求2所述的免疫检测方法，其特征在于，所述的免疫双抗夹心法为ELISA 双抗夹心法，按以下步骤进行处理：包被捕获抗体SP-1，封闭，洗涤，加入抗原，加入酶标的 检测抗体HRP-SP-2，洗涤，加显色底物，加显色终止液，用酶标仪测定样品的吸光值450nm- 630nm。

4.根据权利要求3所述的免疫检测方法，其特征在于，所述的抗原为待测蜂蜜或已知蜜 源的纯蜂蜜，通过比较待测蜂蜜和已知蜜源的纯蜂蜜的MRJP1的吸光值判断待测蜂蜜的质 量。

5.根据权利要求3所述的免疫检测方法，其特征在于，所述的抗原为已知的不同浓度的 MRJP1，绘制以MRJP1浓度为横坐标，以OD₄₅₀-OD₆₃₀为纵坐标的标准曲线，建立回归方程；

所述的抗原为待测蜂蜜时，将获得的吸光值，代入上述回归方程，从而得到待测蜂蜜中 MRJP1的含量。

6.根据权利要求5所述的免疫检测方法，其特征在于，通过比较待测蜂蜜和已知蜜源的 纯蜂蜜的MRJP1的含量判断待测蜂蜜的质量。

7.根据权利要求2所述的免疫检测方法，其特征在于，所述的MRJP1特异性多克隆抗体 SP-1、SP-2的效价均＞1:20000，酶标抗体HRP-SP-2的效价＞1:5000，以合成多肽M4、M5和 纯化的MRJP1为抗原，经ELISA测定。

8.一种采用如权利要求2所述的免疫检测方法的试剂盒，其特征在于，主要包括MRJP1 特异性多克隆抗体SP-1、SP-2抗体对，其中以MRJP1特异性多克隆抗体SP-1为捕获抗体， MRJP1特异性多克隆抗体SP-2为检测抗体，以双抗夹心法测定待测蜂蜜中MRJP1含量。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒为ELISA或者免疫层析试 纸条试剂盒。