[发明专利]一种快速检测猪瘟病毒/猪繁殖与呼吸综合征病毒/猪伪狂犬病毒/猪细小病毒的试剂盒

权利要求书

1.一种快速检测猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒、猪细小病毒试剂盒，包括：1)RT-PCR反应液、引物探针混合液、RT-PCR反应酶系、DEPCH₂O，阴性质控品、阳性质控品和2)分隔并集中包装这些试剂瓶或管的包装盒，其中引物探针混合液由四种病毒特异性的正、反向引物及特异性的探针组成，其特征在于：

1)猪瘟病毒特异性的正向和反向引物的序列分别是5’-ATGCAGATGGTGTGGCTTYG-3’和5’-AAGCATCATGACTCCCCYC-3’，猪瘟病毒特异性探针的序列是5’-AGCCYGACGGACTCCCRCACTACC-3’，探针的5’端和3’端分别结合有荧光发生基团FAM和荧光淬灭基团BHQ1；

2)猪繁殖与呼吸综合征病毒特异性的正向和反向引物的序列分别是5’-TTGTGTCTGTCGTCGATCCA-3’和5’-CGTMGGCAAACTAAACTCCA-3’，猪繁殖与呼吸综合征病毒特异性探针的序列是5’-TTCAATCAGGGCGCTGGRACTTGTG-3’，探针的5’端和3’端分别结合有荧光发生基团HEX和荧光淬灭基团BHQ1；

3)猪伪狂犬病毒特异性的正向和反向引物的序列分别是5’-GAGCGACGACAGCTTCAAG-3’和5’-CGTTCTTGCGGTACCAGTAG-3’，猪伪狂犬病毒特异性探针的序列是5’-CGTGGACGTGATGCGATTCCTGACG-3’，探针的5’端和3’端分别结合有荧光发生基团TexasRed和荧光淬灭基团BHQ2；和

4)猪细小病毒特异性的正向和反向引物的序列分别是5’-AATTTCAATACTTGGGGGAGG-3’和5’-ATGTATTCTTTTGTATGTTTCGTGTT-3’，猪细小病毒特异性探针的序列是5’-CACTGCACACGCATCAAGACTCATACATC-3’，探针的5’端和3’端分别结合有荧光发生基团Cy5和荧光淬灭基团BHQ3。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征还在于引物探针混合液中引物浓度均为0.2～0.5μmol/L，探针浓度均为0.1～0.25μmol/L。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征还在于RT-PCR反应液由pH值为8.0～8.8的50mmol/L Tris-HCl、3～8mmol/L MgCl₂、150～350mmol/L KCl组成。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征还在于RT-PCR反应酶系由热启动Taq酶、逆转录酶、dNTPs组成，且每人份RT-PCR反应酶系中热启动Taq酶的用量为5～10U；逆转录酶用量为1.5～5U；dNTPs为6～12mmol。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征还在于PCR扩增的条件为：50℃15分钟，95℃15分钟；94℃10秒，58℃35秒，40个循环。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征还在于，所属试剂盒还包括阴性质控品和阳性质控品，所述阴性质控品为健康猪只血浆，所述阳性质控品为基因合成方式制备的含猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒、和猪细小病毒目的基因的重组质粒。