[发明专利]一种利用ISSR分子标记鉴定巴马香猪的方法

说明书

本发明提供了一种利用ISSR分子标记鉴定巴马香猪的方法。通过将特定的DNA提取过程、特定的PCR扩增引物及特定的PCR扩增体系等特定地结合，本发明方法能在区分巴马香猪、环江香猪、藏猪、巴马本地土猪和成华猪的基础上，对未知样品进行准确鉴定，判断是否为巴马香猪。本发明鉴别快速，结果可靠，有助于促进巴马香猪产业的发展。

技术领域

本发明涉及生物领域，具体涉及一种利用ISSR分子标记鉴定巴马香猪的方法。

背景技术

巴马香猪源于广西巴马瑶族自治县，为一种珍稀的，且具有地方优势的品种猪，其肉质细嫩、香甜可口、风味独特，可用于制作腊全猪、烤乳猪、腌肉，颇受消费者青睐。但是，随着对其需求的增加，一方面在养殖行业中出现许多杂交品种，另一方面，有些不法商贩会将一些其他品种的乳猪（如陆川乳猪）假冒巴马香乳猪用于生产烤香猪和腊香猪，产品失去了正宗香猪的原汁原味，出现以次充好的情形。目前，其相关鉴别方法以外观描述为主，缺乏准确的鉴定方法对未知肉制品是否为巴马香猪进行鉴定。因此，市场上销售的巴马香猪肉制品真伪难辨。

DNA分子标记，也称DNA多态性标记，可直接反应DNA水平上遗传多态性，其具有以下优点：首先，结果不受环境条件、发育阶段、及个体和生物组织器官的影响和限制；其次，可供选择的分子标记数量多。ISSR分子标记属于DNA分子标记技术中的一种，已经被证明是分析基因多样性的一种高效、经济的方式，现已广泛用于种类鉴定和遗传关系分析。授权公告号为CN103215365B的专利中公开了名称为一种陆川猪及其肉制品的DNA分子鉴定方法，该方法按a、提取生鲜肉及其肉制品的总DNA；b、利用ISSR-PCR反应扩增生鲜肉及其肉制品的DNA；c、构建生鲜肉及其肉制品的DNA电泳图谱；d、鉴定陆川猪及其肉制品的步骤进行，最终绘制了7张陆川猪及其肉制品的电泳图谱，建立了陆川猪及其肉制品的DNA指纹图谱，可作为区分鉴定陆川猪及其肉制品的依据。同时，该专利中利用WM29引物可将陆川猪从巴马香猪中鉴别出来。但是，并没有针对巴马香猪鉴定的方法，通过此引物也不能判断未知样品是否为巴马香猪。因此，建立一种针对巴马香猪的准确的DNA鉴定方法，对保障巴马香猪品种纯正，规范巴马香猪市场和推动巴马香猪产业化进程有重要意义。

发明内容

发明人在研究中发现，采用ISSR分子标记鉴定巴马香猪与其他猪品种时会出现以下问题：一方面，在鉴定方法和样品个体差异的共同作用下，鉴定结果表现为个体差异较大，包括同属于巴马香猪这个品种的不同样品的个体差异也较大。这样，同属于巴马香猪的不同个体，无法聚集成一类，其相似系数较低，可能出现将巴马香猪被错误鉴定为不是巴马香猪的问题。另一方面，可能出现巴马香猪样品与其他猪品种之间差异不明显，这样就可能出现将其他品种的猪错误地鉴定为巴马香猪的结果。因此需要一种既能将巴马香猪样品与其他品种的猪样品显著区分，也能使巴马香猪不同个体样品聚集成簇，且其相似系数较高的ISSR分子标记鉴定方法。

本发明旨在解决巴马香猪肉制品真伪难辨，缺乏准确且快速的鉴定方法及上述研究过程中出现的问题，提供一种利用ISSR分子标记对巴马香猪进行鉴定的方法，不但能够快速、准确地将巴马香猪、环江香猪、藏猪、巴马本地土猪和成华猪区分开，还能准确地鉴定未知样品是否为巴马香猪，避免鉴定误差。

为解决上述技术问题，本发明通过以下技术方案实现：

一种利用ISSR分子标记进行UPGMA聚类分析来鉴定巴马香猪的方法。

所述利用ISSR分子标记鉴定巴马香猪的方法，包括以下步骤：

A.样品DNA提取；

B.PCR反应及产物检测；

C.UPGMA聚类分析，与标准品的相似系数≥0.94，即可鉴定样品为巴马香猪。