[发明专利]利用PCR技术检测山羊TMEM95基因微小拷贝数变异的方法及其应用有效
| 申请号： | 201610149981.5 | 申请日： | 2016-03-16 |
| 公开（公告）号： | CN105624314B | 公开（公告）日： | 2019-04-05 |
| 发明（设计）人： | 蓝贤勇;张思欢;吴贤锋;杨青;许晗;陈宏;雷初朝 | 申请（专利权）人： | 西北农林科技大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888 |
| 代理公司： | 西安通大专利代理有限责任公司 61200 | 代理人： | 陆万寿 |
| 地址： | 712100 陕*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 利用 pcr 技术 检测 山羊 tmem95 基因 微小 拷贝 变异 方法 及其 应用 | ||
1.一种利用PCR技术检测山羊TMEM 95基因微小拷贝数变异的方法，其特征在于：包括以下步骤：以待测山羊全基因组DNA为模板，以引物对P1为引物，通过PCR扩增山羊TMEM 95基因部分片段，再对PCR的扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳；根据琼脂糖凝胶电泳结果鉴定山羊TMEM 95基因NC_022311.1的chr19：26355471-26355528非编码区58bp微小拷贝数变异；
所述引物对P1为：
上游引物：5’-AAGCTCGGATCCTGCTCCTCTTTGTGTG-3’；
下游引物：5’-GGCTAGGCTCTGTCCTCGTTT-3’；
所述山羊TMEM 95基因非编码区58bp微小拷贝数变异为：2个拷贝表现为一条253bp条带；3个拷贝表现为253bp和311bp两条条带、或者还同时存在由于异源双链结合而形成的不同结构的第三条或者第四条条带；4个拷贝表现为一条311bp条带。
2.根据权利要求1所述一种利用PCR技术检测山羊TMEM 95基因微小拷贝数变异的方法，其特征在于：所述PCR的扩增反应程序为：
1)94.0℃预变性5min，然后进入步骤2)；
2)94.0℃变性30s，60.0℃复性30s，72.0℃延伸30s，共40个循环；
3)经过步骤2)后，72.0℃延伸10min。
3.根据权利要求1所述一种利用PCR技术检测山羊TMEM 95基因微小拷贝数变异的方法，其特征在于：所述琼脂糖凝胶电泳采用质量分数为2.5％的琼脂糖凝胶。
4.一种如权利要求1所述利用PCR技术检测山羊TMEM 95基因微小拷贝数变异的方法在山羊分子标记辅助选择育种中的应用。
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