[发明专利]核酸提取用磁性微珠的制备方法

权利要求书

1.核酸提取用磁性微珠的制备方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：

一、向30mL、0.5mol/L柠檬酸溶液中加入5g纳米Fe₃O₄，调节溶液的pH值至5.5，在氮气保护下搅拌，然后将纳米Fe₃O₄取出，用丙酮洗涤，再将纳米Fe₃O₄放入去离子水中超声波分散，之后加入无水乙醇，形成乙醇-水体体系，并调节溶液的pH值至6，然后向含有纳米Fe₃O₄的乙醇-水体溶液滴加正硅酸乙酯，纳米Fe₃O₄与正硅酸乙酯的质量比为1:1，升温至60～80℃，搅拌反应8h，最后将纳米Fe₃O₄依次用去离子水和无水乙醇冲洗，干燥箱干燥，得到Fe₃O₄/SiO₂磁性微珠；纳米Fe₃O₄的粒径为13nm；

二、将步骤一制备的Fe₃O₄/SiO₂磁性微珠加入乙醇-水溶液中，再分别加入质量浓度为28％的浓氨水和TEOS，于室温振荡反应3h，然后取出磁性微珠用去离子水洗涤至中性，再依次用无水乙醇和丙酮洗涤，之后于60℃真空干燥，再将磁性微珠放入质量浓度为35％的稀盐酸溶液中浸泡，然后重新用去离子水洗涤至中性，再依次用无水乙醇和丙酮洗涤；

三、将步骤二洗涤后的磁性微珠分散于无水甲苯中，在氮气保护下加入环氧丙氧基丙基三甲氧基硅烷试剂，回流反应，得到改性磁珠，将所得改性磁珠依次用甲苯、甲醇、甲醇水溶液和甲醇洗涤并抽干，烘干后得到表面键合环氧基的磁性微珠；

四、将烘干得到表面键合环氧基的磁性微珠分散于pH值为3的质量浓度为35％的稀盐酸溶液中，在100℃下加热回流2h，产物以去离子水洗涤至中性后，再分别以无水乙醇和丙酮洗涤，过滤收集磁性微珠，烘干得到表面键合二醇基的磁性微珠；

其中步骤二所述乙醇-水溶液中无水乙醇和水的体积比为5:1；步骤三中甲醇水溶液的体积浓度为50％；步骤四中表面键合环氧基的磁性微珠的质量与稀盐酸溶液的体积比为1g:10mL。

2.根据权利要求1所述的核酸提取用磁性微珠的制备方法，其特征在于步骤二中Fe₃O₄/SiO₂磁性微珠的质量与乙醇-水溶液的体积比为1g:(38～39)mL，Fe₃O₄/SiO₂磁性微珠的质量与氨水的体积比为5g:(3～5)mL，Fe₃O₄/SiO₂磁性微珠质量与TEOS的体积比为5g:(1～2)mL。

3.根据权利要求1所述的核酸提取用磁性微珠的制备方法，其特征在于步骤三中磁性微珠的质量与无水甲苯的体积比为1g:(5～6)mL，磁性微珠的质量与环氧丙基丙氧基硅烷的体积比为5g:(1～2)mL。

4.根据权利要求1所述的核酸提取用磁性微珠的制备方法，其特征在于步骤三中回流反应的条件为在110℃下回流反应8h。