[发明专利]一种重组人胰岛素原融合蛋白的复性方法

权利要求书

1.一种重组人胰岛素原融合蛋白的复性方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将表达重组人胰岛素原融合蛋白的大肠杆菌进行破碎，收集包涵体；

2)使用包涵体洗涤液对于包涵体进行洗涤，所述包涵体洗涤液是含有终浓度50mM Tris-HCl、2mM EDTA、质量比1％Triton-X100和3M尿素的溶液，该包涵体洗涤液的pH为9.0-9.5；

3)去除洗涤液后，在包涵体里加入变性剂，所述包涵体变性剂是含有终浓度50mM的Tris-HCl、终浓度2mM的EDTA和终浓度8M的尿素的溶液，该包涵体变性剂的pH为9.0-9.5；

4)加入还原剂，所述还原剂为巯基还原剂，使用终浓度为5-20mM，获得还原蛋白溶液；

5)是将配好的复性缓冲液缓慢加入4)中的还原蛋白溶液中，轻微搅拌，进行重组人胰岛素原融合蛋白的复性，各组分终浓度分别为0.8M的尿素、1mM的氧化型谷胱甘肽、1mM的还原型谷胱甘肽、2mM的EDTA和终浓度2mM的β-巯基乙醇，调pH9.0-9.5，得到优化的复性蛋白溶液。

2.如权利要求1所述的复性方法，其特征在于，步骤1)中所述的破碎为超声破碎、高压菌体破碎或均质机破碎。

3.如权利要求1所述的复性方法，其特征在于，步骤2)所述的洗涤为2-5次洗涤。

4.如权利要求1所述的复性方法，其特征在于，步骤4)所述的巯基还原剂为二硫苏糖醇，使用终浓度为10mM。

5.如权利要求1所述的复性方法，其特征在于，步骤4)所述的还原蛋白溶液的蛋白浓度为50-100mg/ml。

6.如权利要求1所述的复性方法，其特征在于，步骤5)所述的优化的复性蛋白溶液的蛋白浓度为5-10mg/ml。