[发明专利]基于UPC2‑ELSD测定蜂蜜中4种主要单糖和双糖含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种基于UPC²-ELSD同时测定蜂蜜中4种主要单糖和双糖含量的方法，特别涉及利用UPC²-ELSD同时测定蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖和麦芽糖含量的方法，属于食品检测技术领域。

背景技术

蜂蜜，是一种糖的过饱和物质，其主要成分是果糖、葡萄糖等2种单糖，次要成分是少量的蔗糖、麦芽糖等2种双糖。GB/T 14963-2011《食品安全国家标准蜂蜜》中要求果糖和葡萄糖该两种单糖总含量＞60％，蔗糖含量一般＜5％(除“树蜂蜜、柑橘蜜、紫苜蓿蜂蜜、荔枝蜂蜜、野桂花蜜”之外的蔗糖含量允许小于10％)。我国是世界第一养蜂大国，蜂群数量和主要蜂产品出口均居世界第一，蜂蜜年产量超30万吨，为国民经济的发展和人民的健康做出了积极贡献。因此，建立一种简便、快速、高效地测定蜂蜜中的含量最高的4种单、双糖——果糖、葡萄糖、蔗糖和麦芽糖的方法，将有助于蜂蜜产品质量达到上述标准，从而降低蜂蜜掺假的隐患，为实现蜂蜜大国转变成蜂蜜强国提供有力的技术支撑。

现有国标GB/T 18932.22-2003《蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖含量的测定方法》中采用液相色谱-示差折光检测法测定蜂蜜中该4种糖的含量，该方法虽具有较好的分离度和准确性，但示差检测器对温度变化极其敏感使得基线稳定时间较长，也不适合梯度洗脱，且检测灵敏度较低。

目前有相关文献报道，可以采用HPLC结合C-CAD或ELSD，进行等度洗脱来检测食物中糖类化合物的方法，如果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖和麦芽三糖等。但是采用HPLC结合C-CAD进行等度洗脱存在实质性的缺陷，如时间长，效率低，HPLC使用的糖柱或氨基柱易发生化学降解而导致测试结果稳定性相对较差，从而导致仪器损耗大，成本高，不利于推广应用。UPC² (Ultra-performance convergence chromatography,超高效合相色谱)是Waters公司新推出的基于超临界流体色谱的技术体系，其流动相以超临界CO₂为主要组成，具有粘度低、分子扩散快、分离效率高、绿色环保的优势。中国专利(公开号为CN 105301131A)成功将UPC²–ELSD用于测定分子蒸馏单硬脂酸甘油酯中单甘酯，具有简便、快速、高效的特点。但是目前并没有将UPC²–ELSD用于检测蜂蜜中糖类化合物的任何相关报道，而糖类化合物与酯类化合物存在的最大区别点在于，糖类化合物比酯类化合物具有更强的极性，特别是糖类中的单糖或低聚糖类等存在大量的同分异构体，如单糖中的果糖和葡萄糖，是互为同分异构体，二糖中的蔗糖和麦芽糖，也是互为同分异构体，因此糖类化合物比酯类化合物更难实现分离。

发明内容

针对现有的关于蜂蜜中糖类化合物的检测技术存在的缺陷，本发明的目的是在于提供一种简便高效、稳定性好、快速精确测定蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖和麦芽糖方法。

为了实现上述技术目的，本发明提供了一种基于UPC²-ELSD同时测定蜂蜜中4种主要单糖和双糖含量的方法，该方法是将蜂蜜样品溶液依次经过UPC²分离和ELSD检测，采用外标法进行定量分析，得出蜂蜜样品中果糖、葡萄糖、蔗糖和麦芽糖各自的含量。

优选的方案，包括以下步骤：(1)将果糖、葡萄糖、蔗糖和麦芽糖的混合标准液依次经过UPC²分离和ELSD检测，依据检测结果建立标准曲线；(2)将蜂蜜样品溶液依次经过UPC²分离和ELSD检测，依据标准曲线对检测结果进行定量分析，得出蜂蜜样品中果糖、葡萄糖、蔗糖和麦芽糖各自的含量。

较优选的方案，检测混合标准液及蜂蜜样品溶液过程中，UPC²控制的条件参数如下：

色谱柱：ACQUITY UPC²BEH色谱柱，100mm×3.0mm，亚乙基桥化颗粒， 1.7μm；

柱温：50℃；

样品室温度：10℃；

流动相A：超临界CO₂；

流动相B：甲醇溶液，含体积百分数0.2％的NH₃·H₂O；

洗脱梯度：

背压：1700psi；

流速：1.0mL/min；

进样体积：1μL；