[发明专利]诱导造血干祖细胞增殖和红系分化的方法及其应用

说明书

本发明公开了诱导造血干祖细胞增殖和红系分化的方法及其应用，其中，诱导造血干祖细胞增殖和红系分化的方法包括：利用第一培养基对造血干细胞进行第一培养，得到扩增后的造血干细胞，其中，第一培养基为添加了第一添加剂的Stemspan无血清培养基或SCGM无血清培养基，且第一添加剂为选自重组人干细胞因子、重组人促红素、白介素‑3、白介素‑6和FMS样酪氨酸激酶3的至少一种；以及利用第二培养基对上述扩增后的造血干细胞进行第二培养，得到红系祖细胞，其中，第二培养基为添加了第二添加剂的SCGM无血清培养基，且第二添加剂为选自重组人干细胞因子、胰岛素样生长因子1、重组人促红素、转鉄蛋白、地塞米松、谷胺酰胺和类脂的至少一种。

技术领域

本发明涉及生物工程领域，具体地，涉及诱导造血干祖细胞增殖和红系分化方法及其应用，更具体地，涉及诱导造血干祖细胞增殖和红系分化的方法、用于诱导造血干祖细胞增殖和红系分化的试剂盒和用于诱导造血干祖细胞增殖和红系分化的系统。

背景技术

近年来由于血液来源紧张以及输血相关疾病的发生使人们期望寻找更为安全、充足的血液来源。研究表明干细胞在体外能够诱导红系分化为红细胞可作为新的血液来源。除了成熟红细胞外，红系祖细胞也可以替代临床红细胞输注，发挥其造血支持治疗作用，而且红系祖细胞能够在体内继续增殖，对于很多需要反复输血治疗的患者，有望减少输血次数以及输血产生的副作用，从而，红系祖细胞为临床血液供应提供新的替代途径。

然而，目前的红系祖细胞扩增和诱导体系，还存在增殖和诱导红系分化效率低等问题，仍需改进。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种诱导造血干祖细胞增殖和红系分化的方法，该方法的扩增和诱导红系分化效率高。

因而，根据本发明的一个方面，本发明提供了一种诱导造血干祖细胞增殖和红系分化的方法。根据本发明的实施例，该方法包括：利用第一培养基对造血干细胞进行第一培养，以便得到扩增后的造血干细胞，其中，所述第一培养基为添加了第一添加剂的Stemspan无血清培养基或SCGM无血清培养基，且所述第一添加剂为选自重组人干细胞因子、重组人促红素、白介素-3、白介素-6和FMS样酪氨酸激酶3的至少一种；以及利用第二培养基对所述扩增后的造血干细胞进行第二培养，以便得到红系祖细胞，其中，所述第二培养基为添加了第二添加剂的SCGM无血清培养基，且所述第二添加剂为选自重组人干细胞因子、胰岛素样生长因子1、重组人促红素、转鉄蛋白、地塞米松、谷胺酰胺和类脂的至少一种。

发明人惊奇的发现，利用本发明的方法，采用无血清培养体系，先利用含有扩增因子的第一添加剂进行第一培养培养，促进造血干细胞的增殖，再利用含有诱导因子的第二添加剂进行第二培养，促进造血干细胞的诱导红系分化，相对于用单一的诱导培养基进行诱导红系分化培养，细胞的扩增倍数显著提高，并且诱导红系分化的效果更好。此外，相对于Stemspan无血清培养基，SCGM无血清培养基价格低，进而，利用本发明的方法诱导造血干祖细胞增殖和红系分化，成本显著降低。

另外，根据本发明上述实施例的诱导造血干祖细胞增殖和红系分化的方法，还可以具有如下附加的技术特征：

根据本发明的实施例，所述第一培养基为添加了第一添加剂的Stemspan无血清培养基。

根据本发明的实施例，在所述第一培养基中，所述重组人干细胞因子的浓度为40-60ng/ml，优选地，为50ng/ml；所述重组人促红素的浓度为5-15ng/ml，优选地，为10ng/ml；所述白介素-3的浓度为15-25ng/ml，优选地，为20ng/ml；所述白介素-6的浓度为5-15ng/ml，优选地，为10ng/ml；所述FMS样酪氨酸激酶3的浓度为40-60ng/ml，优选地，为50ng/ml。