[发明专利]一种筛选促进重金属植物修复根际细菌的方法

权利要求书

1.一种筛选促进重金属植物修复根际细菌的方法，其特征在于， 包括如下步骤：

(1)对植物和土壤样品进行采集操作和预处理操作；

(2)经步骤(1)采集后的样品进行富集处理；

(3)经富集处理后的培养物进行初筛操作；

(4)对初筛后的培养物进行分离处理；

(5)分离得到的菌种进行复筛操作；

所述步骤(2)的富集处理包括富集瓶制作过程、向富集瓶中加入 样品过程和菌种培养过程，所述富集瓶制作过程中需向试剂瓶中加入吸 附载体、重金属化合物、营养肉汤和制霉菌素。

2.根据权利要求1所述的筛选促进重金属植物修复根际细菌的方 法，其特征在于，所述步骤(1)中采集操作为采集重金属污染严重场 地上生长较好的植物样品，包括植物样品的完整根系及其根系周边土 壤；所述步骤(1)中预处理操作为对采集的样品采用无菌水进行初步 冲洗。

3.根据权利要求1所述的筛选促进重金属植物修复根际细菌的方 法，其特征在于，所述步骤(2)富集处理的富集瓶的制作过程中，所 述吸附载体选用活性炭、稻壳、珍珠岩或玉米秸秆中的一种或多种，吸 附载体质量为15～20g并粉碎至边长小于1cm；

所述重金属化合物的加入量按照使所述重金属化合物在所述营养 肉汤中的浓度为步骤(1)中采集地污染土壤中重金属浓度的8～12倍添 加；

所述营养肉汤的加入量为45～55ml，所述营养肉汤的配方为：蛋白 胨10.0g，牛肉浸膏3.0g，氯化钠5.0g，蒸馏水1000ml，调制pH为7.2±0.2；

添加结束，还需将试剂瓶进行灭菌处理和降温处理，最后添加 2.0～3.0mg的制霉菌素。

4.根据权利要求1所述的筛选促进重金属植物修复根际细菌的方 法，其特征在于，所述步骤(2)富集处理中向试剂瓶中加入样品过程 为将样品的植物根系剪断后转移至富集瓶中采用摇床培养方式培养 30～60天，培养过程中，培养温度为30℃，转速为150～180r/min；

菌种培养过程为每5天将前一富集瓶中的50％的固体物质转移到后 一新富集瓶中，在逐步增加富集瓶数量的同时逐步提取固体物质。

5.根据权利要求4所述的筛选促进重金属植物修复根际细菌的方 法，其特征在于，所述步骤(3)中的初筛处理为将经富集培养得到的 最后一个富集瓶中的固体载体采用无菌水冲洗掉附着的土壤颗粒和非 吸附性菌体后置于固体培养基平板上培养形成菌落，

其中，所述固体培养基的配方为：蛋白胨10.0g，牛肉浸膏3.0g， 氯化钠5.0g，琼脂20.0g，蒸馏水1000ml，重金属化合物的加入量为使 所述重金属化合物在蒸馏水中的浓度是采集地污染土壤中重金属浓度 的8～12倍，调制固体培养基pH为7.2±0.2。

6.根据权利要求5所述的筛选促进重金属植物修复根际细菌的方 法，其特征在于，所述步骤(4)中的分离操作为将经步骤(3)初筛处 理后的附着有载体的固体培养基平板上的载体周围的菌苔刮下，并在上 述固体培养基平板上划线分离单菌落，以斜面保存；

其中，所述斜面培养基的配方为：蛋白胨10.0g，牛肉浸膏3.0g， 氯化钠5.0g，琼脂20g，蒸馏水1000ml，并使斜面培养基的pH为7.2±0.2。

7.根据权利要求1～6任意一项所述的筛选促进重金属植物修复根际 细菌的方法，其特征在于，所述步骤(5)中的复筛操作为采取对步骤 (4)中分离出来的各种菌种分别进行实验，实验过程为将经步骤(4) 分离后的菌种分别接种到营养肉汤的试管中进行培养，经培养后的菌液 加入到含有富集植物和重金属化合物的试剂瓶中进行整体培养，并在整 体培养后观察植物的生长状况及检测植物体内的重金属含量而得到有 促进植物对重金属吸附吸收功能的有益菌。