[发明专利]一种筛选高产α毒素的金黄色葡萄球菌菌株方法

权利要求书

1.一种筛选高产α毒素的金黄色葡萄球菌菌株方法，其特征在于：

利用国际标准血清筛选高产α毒素的生产菌株，其过程包括以下步

骤：

（1）菌株的复苏和培养：用于保证候选菌株处于活化状态；

（2）样品制备：规定α毒素样品的制备过程和方法；

（3）溶血反应：规定溶血反应实施过程，对各反应体系的构成进行约束；

（4）溶血记录：规定溶血反应结果判断的依据；

（5）判定及结论：规定质量控制点和判断流程，完成筛选过程。

2.根据权利要求1所述的筛选高产α毒素的金黄色葡萄球菌菌株的方法，其特征在于所述步骤（1）菌株的复苏和培养：适当保存形式的临床分离株2株，SA59、SA79、自购菌株CMCC26068、CMCC26002及ATCC?10832?，用营养琼脂斜面复苏（37℃）2代后待用；取菌株斜面培养物用接种环接种至5ml营养肉汤培养基，37℃培养24小时。

3.根据权利要求1所述的筛选高产α毒素的金黄色葡萄球菌菌株的方法，其特征在于所述步骤（2）样品制备：菌株的营养肉汤培养物用0.22μm针头除菌滤器过滤除菌制备α毒素滤液样品。

4.根据权利要求1所述的筛选高产α毒素的金黄色葡萄球菌菌株的方法，其特征在于步骤（3）溶血反应：是指共设9个反应管，分别为溶血组1至5、中和组1、中和组2、阳性对照组、阴性对照组，各反应管加入定量试剂或溶液，室温放置30min后，加入300μl10%兔血红细胞（50%兔血红细胞用无菌生理盐水5倍稀释），置37℃1h，后常温放置1h。

5.根据权利要求1所述的筛选高产α毒素的金黄色葡萄球菌菌株的方法，其特征在于步骤（4）溶血记录：是指用“++++”表示完全溶血（透光程度与阳性对照组一致）、“+++”介于完全溶血与50%溶血之间、“++”表示50%溶血、“+”表示25%溶血、“-”表示未溶血（与阴性对照管一致）。

6.根据权利要求1所述的筛选高产α毒素的金黄色葡萄球菌菌株的方法，其特征在于步骤（5）判定及结论：是指阳性对照组出现完全溶血且阴性对照组不出现溶血，方法过程成立；溶血组管出现完全溶血（++++）、中和组管不出现溶血（-），可说明该菌株产生a毒素；通过对比50%溶血出现的溶血组，可以筛选出a毒素产生能力相对高的菌株。