[发明专利]从漆树木粉中提取具有抗氧化活性的黄颜木素和3,4’,7‑三羟基二氢黄酮醇的方法

说明书

技术领域

本发明涉及从漆树木粉中提取具有抗氧化活性的黄颜木素和3,4’,7-三羟基二氢黄酮醇的方法，属于天然药物领域。

背景技术

漆树是中国重要的特用经济林，目前国内学者对漆树栽培、生漆涂料、漆酚、漆蜡等方面进行了大量的研究。对漆树枝桠茎材中的主要活性成分，国内研究较少。韩国学者对漆树的化学成分和生物活性进行了详细地研究，Park等采用多次硅胶柱层析从漆树木材中分离得到硫黄菊素、漆黄素、黄颜木素、和3,4,3’,4’,7-五羟基黄烷。Kim等采用XAD-2D、硅胶柱和ODS 反向硅胶柱对漆树木材的乙酸乙酯萃取部位进行分离，得到黄颜木素、没食子酸和漆黄素。Kang等从漆树皮中分离得到具有抗病毒作用的黄颜木素、漆黄素、硫黄菊素和紫铆花素四种黄酮化合物。黄酮的分离绝大多数采用硅胶柱层析，由于化合物在溶解性上存在很大差异，根据相似相溶原理，采用极性较小的洗脱体系，如不同的石油醚或乙醚与乙酸乙酯比例洗脱极性由小大到的化合物，再逐渐增加洗脱体系的极性，如氯仿与甲醇的不同洗脱比例。但是一些极性与分子结构相似的化合物很难通过硅胶柱层析直接获取，往往需要与其它的分离手段进行协同，如制备型高效液相色谱（Pre-HPLC）。 Pre-HPLC具有准备确度高，分离速度快，能够使用反相C18色谱柱，大大地提高了多酚类化合物的分离度，但是其处理样品量较小。中低压分离色谱（MPLC），具有上样量大，高效，快速等优点，是新型的分离纯化技术，广泛应用于天然产物、食品、生物医药等领域。

我国是漆树的原产地，主要集中在陕西、四川、重庆、湖北、贵州、甘肃和云南七个省，在镇雄、大方、毕节、赫章、北川、恩施等 60 多个县建立了漆树产业化种植基地，种植面积达100万hm2，栽种漆树达150,000 万株。但是目前漆树的产业主要集中在天然生漆涂料的生产及开发，在漆籽的利用方面也比较薄弱，另外在漆树生长、利用过程中，大量的枝桠茎材未得到利用，为了扩大漆树产业的规模化，延伸漆树资源的产业链，因此开展漆树多酚中具有抗氧化活性化合物的提取和制备研究，对于漆树资源的开发利用具有指导意义。

发明内容

为实现上述目的，发明了从漆树木粉中提取具有抗氧化活性的黄颜木素和3,4’,7-三羟基二氢黄酮醇的方法，其特征在于由以下步骤组成：

第一步

将漆树木粉，干燥去渣，按质量体积比为1:10~1:30(g:mL)，加入质量分数为50~95%的乙醇或甲醇水溶液，减压回流提取2~3次，每次1~3h，过滤，滤液合并，于40~60℃下减压蒸发除去溶剂，得到含水粗提液；

第二步

粗提液按质量比1:3~1:10(g:mL)加入蒸馏水，搅拌溶解，加入石油醚萃取1~5次，分离，在40~60℃下减压蒸发除去溶剂，得到石油醚萃取物；水层继续用乙酸乙酯萃取1~5次，分离，在40~60℃下减压蒸发除去溶剂，干燥得到乙酸乙酯萃取物;

第三步

将乙酸乙酯萃取物与硅胶填料按质量比1:15-50吸附，柱长50-150 cm，柱直径4-20 cm，采用不同比例石油醚与乙酸乙酯进行洗脱，收集抗氧化活性较高的石油醚:乙酸乙酯体积比为7:3-3:7(v:v)的部位，真空浓缩，回收溶剂，得到富含黄颜木素和3,4’,7-三羟基二氢黄酮醇的提取物；

第四步

将富含黄颜木素和3,4’,7-三羟基二氢黄酮醇的提取物与中低压色谱填料按质量比1:15-50吸附，中压柱柱长20-80 cm，柱直径2-8 cm，采用不同比例的洗脱剂进行洗脱，柱压为0.5-10 MPa, 检测波长220-280 nm，流速3-50 mL/min，分别收集黄颜木素和3,4’,7-三羟基二氢黄酮醇部位，真空浓缩，回收溶剂，得到黄颜木素和3,4’,7-三羟基二氢黄酮醇样品，将黄颜木素和3,4’,7-三羟基二氢黄酮醇进行HPLC分析，含量为95%以上；

第五步