[发明专利]一种双孢蘑菇褐腐病菌分子检测引物及快速检测方法有效
| 申请号： | 201610155507.3 | 申请日： | 2016-03-18 |
| 公开（公告）号： | CN105734132B | 公开（公告）日： | 2019-01-04 |
| 发明（设计）人： | 杜宜新;陈福如;石妞妞;阮宏椿;甘林;杨秀娟;代玉立 | 申请（专利权）人： | 福建省农业科学院植物保护研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 福州元创专利商标代理有限公司 35100 | 代理人： | 蔡学俊 |
| 地址： | 350013 福建省福*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 蘑菇 病菌 分子 检测 引物 快速 方法 | ||
1.一种双孢蘑菇褐腐病菌分子检测引物，其特征在于：引物的核苷酸序列为：
上游引物MSF：5’-CCGGGGACCTAAACTCTTCTG-3’
下游引物MSR：5’-AAAGTTGGGGTTTTACGGCG-3’。
2.一种双孢蘑菇褐腐病菌的快速检测方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)从感染褐腐病菌的双孢蘑菇或用于双孢蘑菇栽培覆土的土壤中提取DNA；
(2) 以从感染褐腐病菌的双孢蘑菇或用于双孢蘑菇栽培覆土的土壤中提取的DNA为模板进行PCR扩增：PCR反应体系25μL，包含2.5μL 10×PCR buffer，2.0μL浓度为2.5mmol/L的dNTP Mixture，0.15μL浓度为5U/μL的Taq酶，10μmol/L权利要求1所述的引物MSF和引物MSR各0.5μL，DNA模板1μL，加ddH2O至总体积达25μL；PCR反应条件为：94℃预变性5min；94℃变性45sec，55℃退火45sec，72℃延伸1min，共35个循环；72℃延伸10min；
(3)上步所得的PCR产物在1.2%琼脂糖凝胶上用0.5×TBE缓冲液电泳分析，电压为4-5V/cm；根据扩增产物的大小判定检测结果，如果能特异性扩增出397bp的产物，则判定双孢蘑菇或用于双孢蘑菇栽培覆土的土壤中存在蘑菇褐腐病菌。
3.如权利要求1所述的双孢蘑菇褐腐病菌分子检测引物在土壤检测双孢蘑菇褐腐病菌中的应用。
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