[发明专利]一种针对乙肝表面抗原的检测方法

权利要求书

1.一种针对乙肝表面抗原的检测方法，该方法属于双抗夹心酶联免疫法，该方法是针对乙肝表面抗原的检测，该方法中用于标记抗体的酶是触酶C100，该方法中底物包括双氧水和巯基丙酸修饰的碲化镉量子点。

2.根据权利要求1所述的针对乙肝表面抗原的检测方法，其特征在于包括以下步骤：

1)包被乙肝表面抗体；

2)取步骤1)包被后的抗体，与待测样品混合后于35～39℃避光环境中反应40～80min，洗涤；

3)而后加入生物素化的乙肝表面抗原单克隆抗体混合，于35～39℃避光环境中反应40～80min，洗涤；

4)而后加入链霉亲和素标记的触酶C100混合，于35～39℃避光环境中反应40～80min，洗涤；

5)而后加入浓度为8～12μmol/L的双氧水溶液混合，于35～39℃避光环境中反应20～40min；

6)而后加入巯基丙酸修饰的碲化镉量子点混合，于室温避光环境中反应10～20min；

7)检测步骤6)产物的荧光强度。

3.根据权利要求2所述的针对乙肝表面抗原的检测方法，其特征在于步骤1)具体包括以下操作：

A)在酶标板上以0.04～0.06mol/L、pH9.4～9.8的碳酸盐缓冲液作为包被液，稀释乙肝表面抗原多克隆抗体至9～11μg/mL；

B)去除酶标板上的液体后利用洗涤液洗涤酶标板，再加入牛血清白蛋白封闭液，于35～39℃封闭1～3h，而后弃去封闭液。

4.根据权利要求3所述的针对乙肝表面抗原的检测方法，其特征在于步骤A)中包被液的加入量为80～120μg/孔，稀释后静置8～12h再执行步骤B)。

5.根据权利要求2所述的针对乙肝表面抗原的检测方法，其特征在于步骤3)所述生物素化的乙肝表面抗原单克隆抗体是通过以下方法制备的：配制含有1～3mg/mL乙肝表面抗原单克隆抗体、0.07～0.08mg/mL生物素的PBS溶液，于避光条件下反应30～60min，所述PBS溶液的浓度为0.005～0.02mol/L，而后透析去除生物素，即得到所述生物素化的乙肝表面抗原单克隆抗体。

6.根据权利要求2所述的针对乙肝表面抗原的检测方法，其特征在于步骤4)所述链霉亲和素标记的触酶C100是通过以下方法制备的：配制含有0.5～2mg/mL链霉亲和素的PBS溶液，所述PBS溶液的浓度为0.005～0.02mol/L，而后加入SM(PEG)₂₄反应30～60min，而后凝胶柱纯化，收集滤液向其中加入触酶C100至终浓度1～3mg/mL，即得到所述链霉亲和素标记的触酶C100。

7.根据权利要求2所述的针对乙肝表面抗原的检测方法，其特征在于步骤6)所述巯基丙酸修饰的碲化镉量子点是通过以下方法制备的：配制含有8～12mmol/L硝酸镉、20～28mmol/L巯基丙酸、3～7mmol/L碲氢化纳的溶液即为前体溶液，所述前体溶液的pH为11～11.5，将所述前体溶液水浴加热至93～97℃，即得到所述巯基丙酸修饰的碲化镉量子点。

8.根据权利要求2所述的针对乙肝表面抗原的检测方法，其特征在于步骤7)中荧光强度的检测是利用酶标仪实现的，激发波长为310nm，发射波长为590nm。

9.根据权利要求2～8任一项所述的针对乙肝表面抗原的检测方法，其特征在于所述洗涤是利用洗涤液冲洗或浸泡，所述洗涤液是含有0.3～0.7％(v/v)吐温-20的PBST溶液，所述PBST溶液的浓度为0.005～0.02mol/L，所述PBST溶液的pH为7.0～7.5。