[发明专利]一种针对乙肝表面抗原的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及抗原检测技术领域，进一步涉及基于ELISA的抗原检测技术，具体涉及一种针对乙肝表面抗原的检测方法。

背景技术

乙型肝炎是世界最常见的一种传染病，严重危害人类健康，是由乙型肝炎病毒引起，并且常伴随乙肝和肝硬化导致死亡，其主要通过血液、医疗器械、母婴传播和生殖细胞等传播方式。主要临床表现有疲乏无力、食欲不振、腹胀、黄疽、肝脏和脾脏肿大、肝功能异常和肝组织有程度不等的炎症、坏死和纤维化病变。可表现多种临床类型:慢性HBV携带者、急性肝炎、慢性肝炎、重型肝炎、淤胆型肝炎和肝炎肝硬化、肝细胞癌等。乙型肝炎在各国的感染率也不相同，有高流行区，中流行区，低流行区；发达国家，如欧美其感染率较小，一般在1％以下，且感染年龄偏大；日本、地中海和南美地区其乙肝感染率为2％-7％，儿童和新生儿感染较多；在亚洲和非洲为高流行区，其感染率非常高。

乙肝表面抗原为乙型肝炎的标志物，通常在感染1-6周之类出现乙肝表现抗原标志物。现今，检测乙肝表面抗原的常用方法包括胶体金免疫层析法(gold-immunochromatography assay,GICA)、酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbentaasay,ELISA)、微粒子酶免疫分析法(micro-chemiluminescence immunoassay,MEIA)和时间分辨荧光免疫法(time-resolved fluorescence immunoassay,TRFIA)等各种方法。胶体金免疫层析法在试剂形式和操作步骤上较为简化，只需用一个试剂，只有一步操作。但该方法简便、快速、单份测定、结果可立等可取、除试剂外无需任何仪器设备等优点，但这类试验不能准确定量，限制其应用。时间分辨荧光免疫法具有灵敏度高等特点，但需依赖于昂贵的仪器设备和熟练的操作人员，且样品处理复杂，因此无法满足基层及现场实地监控的需要。然而，酶联免疫吸附法(ELISA)方法因具有快速、灵敏、特异、准确、可定量、操作简便、无需贵重仪器设备，且对样品纯度要求不高，特别适用于大批量样品的检测等优点，已成为乙肝表面抗原快速筛查检测的主要方法。现有技术中针对乙肝表面抗原的ELISA检测方法普遍基于辣根过氧化物酶标记的抗体或抗原催化双氧水生成羟自由基，进而氧化无色的化学显色底物四甲基联苯二胺 (TMB)形成蓝色产物，然后使用终止液(2M H₂SO4)终止反应形成黄色溶液于450nm处记录吸光度值。该类方法因其显色强度较低，因此检测灵敏度相对较低，当待测样品中目标物含量较低时易出现假阴性结果，从而无法满足实际应用的要求。

近年，一些新型的信号传导机制被报道用于替代传统ELISA的信号传导机制用于提高传统ELISA的灵敏度，如放射免疫分析底物、化学发光底物、荧光底物以及共振胶体金溶液等。其中，基于荧光底物的ELISA因其具有较高的灵敏度而受到了广泛的关注。据报道，用荧光底物替代显色底物至少可以提高检测灵敏约1-2个数量级。

发明内容

本发明旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种针对乙肝表面抗原的检测方法，以解决现有技术的乙肝表面抗原ELISA检测方法精度较低。

本发明要解决的另一技术问题是现有技术用于乙肝表面抗原检测的ELISA方法中，标记抗体的酶灵敏性较低。

本发明要解决的再一技术问题是现有技术用于乙肝表面抗原检测的ELISA方法中，显色系统灵敏性较低。

本发明要解决的又一技术问题是当采用触酶C100作为抗体标记酶对乙肝表面抗原执行ELISA检测时，具体工艺方法并不明确。

本发明要解决的又一技术问题是当采用触酶C100作为抗体标记酶、采用双氧水和巯基丙酸修饰的碲化镉量子点作为底物对乙肝表面抗原执行ELISA检测时，检测结果与抗原浓度的线性关系不佳。

本发明要解决的又一技术问题是当采用触酶C100作为抗体标记酶、采用双氧水和巯基丙酸修饰的碲化镉量子点作为底物对乙肝表面抗原执行ELISA检测时，过程中洗涤效果不佳。

为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：

一种针对乙肝表面抗原的检测方法，该方法属于双抗夹心酶联免疫法，该方法是针对乙肝表面抗原的检测，该方法中用于标记抗体的酶是触酶C100。

作为优选，该方法中底物包括双氧水和巯基丙酸修饰的碲化镉量子点。其中双氧水作为碲化镉量子点荧光淬灭剂，反应过程中，双氧水在触酶作用下分解， 从而降低荧光淬灭作用，实现发光。

作为优选，该方法包括以下步骤：

1)包被乙肝表面抗体；