[发明专利]完全不动精子的生育力保存方法

权利要求书

1.一种完全不动精子的生育力保存方法，其特征是：由以下步骤构成：

①完全不动精子冷冻方法：

收集完全不动精子后，取小部分出来，用激光鉴定如有存活的精子即判为可冷冻保存， 若无存活精子，则废弃；将剩余精液吸至100～200μL(微升)，放入专用微量精子冷冻管内， 直接用低转速的离心机离心；离心后去除上清液，然后再加入与精子沉淀1∶1体积的精子冷冻 液，混匀，使最终悬液的总体积为10μL；将装有精子悬液的冷冻管置于距液氮面2-3cm处， 熏蒸3～5min，然后直接投入液氮中冷冻保存；解冻时，直接将冷冻管投入到预热好的37℃的 水浴中，放置10min；最后将精子悬液吸出，放置于培养皿中，加入少许培养液稀释后备ICSI 即卵胞浆内单精子注射；

②完全不动精子冷冻前、后精子存活状态的评估：

将获取的不动精子加入到Quinn’s-1020即受精液操作皿中，在视野下选择形态较好的精 子，在精子尾部靠近尾巴尖端处，用1.48μm(微米)的二极管激光束照射精子尾部中下段， 照射时间为2ms(毫秒)，如果激光射击后，精子尾部立即出现明显的卷尾现象，则判定为存 活精子，对激光射击无反应不发生卷尾的为死精子；冷冻前和复苏后分别计算不动精子的存 活率，以冷冻后的存活指数，来评价完全不活动精子的冷冻效果；

对完全不动精子的微量冷冻，其最终精子冷冻悬液的总体积仅为10μL；

上述的对完全不动精子冷冻前、冷冻后的存活情况应用激光进行鉴定。

2.根据权利要求1所述的一种完全不动精子的生育力保存方法，其特征在于：所述的存 活指数是冷冻后的存活率/冷冻前的精子存活率。