[发明专利]利用肌联蛋白多态性检测强直性脊柱炎易感性的试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种检测强直性脊柱炎易感性的试剂盒。

背景技术

强直性脊柱炎又名别赫捷列夫氏（VonBechterev）病或马-施二氏（Maritstrumpell）病，是一种慢性、进行性，中轴关节受累的慢性炎症性疾病。主要影响骨盆的骶髂关节、脊柱关节和椎旁组织。主要症状为下腰痛、脊椎僵硬及运动范围受限、X线显示两侧骶髂关节炎(sacroilitis)为其特征。由于该病一般先侵犯骶髂关节，并重点累及脊柱，最终导致脊柱骨性强直，故目前国内外多称之为强直性脊柱炎（AnkglosingSpondytitis，AS）。

强直性脊柱炎有明显的种族性，在不同民族中发病率的差异很大。印第安人发病率最高，北美印第安人发病率为2.7％～6.3％。其次为白种人，白种人中发病率为0.1％～1.4％。黄种人低于白种人，我国约为0.3％。而黑人发病率最低，约为白人的1/4，在非洲仅为0.2％。

强直性脊柱炎好发于20至40岁的成年人，尤其是20～30岁的青年男性。

强直性脊柱炎呈常染色体显性遗传,有明显的家族遗传倾向,遗传因素>90％。据调查，强直性脊柱炎病人亲属发病率比一般人高一倍左右，同胞复发风险比为82.90％以上的AS病人具有HLA-B27阳性，在正常人群中阳性率为8％；子女HLA-B27阳性占50％，发生强直性脊柱炎的占25％。目前基本上已有定论，HLA-B27作为独立的致病基因在AS的发病中起作用。因为在HLA-B27阳性个体中只有1％～5％发展成为AS，提示还有其他基因参与AS的发病。

TTN全称肌联蛋白，它是骨骼肌纤维中第三类丰富蛋白质，源自M线，并沿肌球蛋白纤维伸展，通过肌节的A带，最后到达Z线。肌联蛋白是高度弹性的分子（伸展时比原长度多出3μm），因此在肌收缩和舒张时保持肌球蛋白纤维位于肌节的中心。肌联蛋白通过将微管之间相连从而使得两个肌小节之间达到完美的力平衡。它是一个巨大的肌小节蛋白,具有复杂的、分子折叠的功能。目前在临床上，肌联蛋白抗体（Titin-ab）可以用来诊断胸腺瘤重症肌无力（MGT）。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种利用肌联蛋白（TTN）多态性检测强直性脊柱炎易感性的试剂盒。本发明通过利用基因型对强直性脊柱炎易感性进行检测，为辅助诊断（尤其是早期诊断）强直性脊柱炎和治疗强直性脊柱炎提供基础。

本发明的第一方面，提供了一种对个体的强直性脊柱炎易感性检测的方法，包括步骤：

检测该个体的TTN基因、转录本和/或蛋白，并与正常的TTN基因、转录本和/或蛋白相比较，存在差异就表明该个体患强直性脊柱炎的可能性高于正常人群。

在一优选例中，所述的方法中检测的是TTN的基因或转录本，并与正常TTN核苷酸序列比较差异。

在另一优选例中，所述的差异是以下的单核苷酸多态性（SNP）：

第1001位A→G；其中，核苷酸位置编号基于SEQIDNO.1。

在本发明的第二方面，提供了一种检测样品是否存在TTN基因的单核苷酸多态性的方法，包括步骤：

1）用TTN基因特异性引物扩增样品的TTN基因，得到扩增产物；

2）检测扩增产物中是否存在以下的单核苷酸多态性：

第1001位A→G；其中，核苷酸位置编号基于SEQIDNO.1。

在一优选例中，所述TTN基因特异性引物具有SEQIDNO.2和3的序列。

在一优选例中，所述扩增产物的长度为100-2000bp，且含有SEQIDNO.1中第1001位。

在本发明的第三方面，提供了一种利用肌联蛋白（TTN）多态性检测强直性脊柱炎易感性（利用基因型检测强直性脊柱炎）的试剂盒，其包括：特异性扩增TTN基因或转录本的引物，更佳地，所述的引物扩增出长度为100-2000bp且含有SEQIDNO.1中第1001位的扩增产物。

在另一优选例中，所述试剂盒还含有选自下组的试剂：

1）与SEQIDNO.1中第1001位的突变结合的探针；

2）识别SEQIDNO.1中第1001位的突变限制性内切酶。

在另一优选例中，所述的突变选自以下的单核苷酸多态性：

第1001位A→G；其中，核苷酸位置编号基于SEQIDNO.1。

所述引物的序列，可如SEQIDNO.2和3所示。