[发明专利]一种真菌菌丝总DNA提取液及提取真菌菌丝总DNA的方法有效
| 申请号： | 201610163675.7 | 申请日： | 2016-03-20 |
| 公开（公告）号： | CN105602941B | 公开（公告）日： | 2018-03-20 |
| 发明（设计）人： | 郭巍;毕扬;张艳杰;李亚宁;赵丹;张汀;刘大群;杨宝东;陈艳 | 申请（专利权）人： | 北京农学院 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京聿华联合知识产权代理有限公司11611 | 代理人： | 刘烽 |
| 地址： | 102206 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 真菌 菌丝 dna 提取 方法 | ||
1.一种真菌菌丝总DNA提取液，其包括提取液I和提取液II，其中所述提取液I包括缓冲盐、非离子表面活性剂、以及中性盐的水溶液，其pH值为7.5-8.5；所述提取液II包括缓冲盐和阳离子表面活性剂，其pH值为7.5-8.5；所述阳离子表面活性剂为阳离子聚丙烯酰胺。
2.根据权利要求1所述的提取液，其特征在于，所述非离子表面活性剂为醇醚硫酸盐。
3.根据权利要求2所述的提取液，其特征在于，所述非离子表面活性剂为脂肪醇醚硫酸铵和/或脂肪醇醚硫酸钠。
4.根据权利要求3所述的提取液，其特征在于，所述非离子表面活性剂为C12～C18的脂肪醇醚硫酸铵和/或脂肪醇醚硫酸钠。
5.根据权利要求4所述的提取液，其特征在于，所述非离子表面活性剂为C12～C15的脂肪醇醚硫酸铵和/或脂肪醇醚硫酸钠。
6.根据权利要求1所述的提取液，其特征在于，所述缓冲盐选自Tris-HCl、磷酸钠、磷酸氢二钠和磷酸二氢钠中的至少一种。
7.根据权利要求1所述的提取液，其特征在于，所述中性盐为氯化盐。
8.根据权利要求7所述的提取液，其特征在于，所述氯化盐为氯化钠和/或氯化钾。
9.一种提取真菌菌丝总DNA的方法，包括如下步骤：
(1)收集真菌菌丝体；
(2)将真菌菌丝体置于如权利要求1-8任意一项中的所述提取液I；
(3)冻融至少1次；
(4)加入如权利要求1-8任意一项中的所述提取液II；
(5)去除不溶物，获得含有真菌DNA的上清液。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，冻融至少2次。
11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，冻融至少3次。
12.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，以体积计，所述提取液I与所述提取液II的比例为10:(1-5)。
13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述提取液I与所述提取液II的比例为10:(1.5-2.5)。
14.根据权利要求9至13中任意一项所述的方法，其特征在于，在步骤(3)中，冷冻的温度为零下196℃至零下20℃，融化的温度为40℃至70℃。
15.根据权利要求14所述的方法，其特征在于，所述冷冻的温度为零下196℃，融化的温度为50℃至60℃。
16.根据权利要求9至13中任意一项所述的方法，其特征在于，以离心的方式去除所述不溶物。
17.根据权利要求16所述的方法，其特征在于，离心速度为10000-15000rpm，离心时间为1-5分钟。
18.根据权利要求9至13中任意一项所述的方法，其特征在于，还包括步骤(6)将所述上清液中的所述真菌DNA沉淀后溶于TE缓冲液中或去离子水中。
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